[发明专利]一种基于G-四聚体的检测方法

权利要求书

1.一种基于G-四聚体的检测方法，其特征在于：利用G-四聚体进行铅离子的胶体金检测。

2.如权利要求1中所述基于G-四聚体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：制备反应液、制备胶体金、制备胶体金-核酸偶联物和检测。

3.如权利要求2中所述基于G-四聚体的检测方法，其特征在于：制备反应液步骤包括：分别配置不同浓度的多种铅离子溶液，作为标准品溶液以绘制标准曲线；配置G-DNA并分别与等体积的样品溶液及标准品溶液混合，使其充分相互作用。

4.如权利要求2中所述基于G-四聚体的检测方法，其特征在于：制备胶体金步骤包括：在容器中加入HAuCl₄溶液，搅拌加热至沸腾，并向上述溶液中加入枸橼酸钠，溶液变为酒红色后，继续煮沸8-15分钟，停止加热继续搅拌10-20分钟，得到胶体金溶液，胶体金溶液4℃避光保存。

5.如权利要求2中所述基于G-四聚体的检测方法，其特征在于：制备胶体金颗粒-核酸偶联物步骤包括：

(1)取浓缩的金纳米颗粒，与超纯水溶解的巯基修饰的DNA，充分混匀；

(2)4℃反应充分；

(3)用BSA进行封闭，逐滴加入BSA，加边震荡，使BSA的终浓度为1％，充分混匀；

(4)4℃封闭3-5小时；

(5)加入NaCl溶液和SDS溶液，使NaCl的终浓度为150mmol/L，SDS的终浓度为0.01％，充分混匀；

(6)4℃老化充分；

(7)4℃离心，弃上清，沉淀用金重悬液重悬，重复离心2-3次，弃上清，留沉淀；

(8)用1mL金重悬液重悬核酸-金标记物沉淀，4℃保存备用。

6.如权利要求5中所述基于G-四聚体的检测方法，其特征在于：所述金重悬液含20mmol/LNa₃PO₄、3％BSA、0.25％Tween-20和10％的蔗糖，pH为7.5。

7.如权利要求2中所述基于G-四聚体的检测方法，其特征在于：检测步骤包括：将上述反应液加入2微升AuNP-核酸偶联物，转移到试纸条上，加入40微升的上样缓冲液，进行检测，检测反应时间为30-90min。