[发明专利]一种Dual-RMCE介导的TCR基因置换系统及其方法有效
| 申请号： | 201510509976.6 | 申请日： | 2015-08-19 |
| 公开（公告）号： | CN105316362B | 公开（公告）日： | 2020-03-17 |
| 发明（设计）人： | 李亮平;龚英 | 申请（专利权）人： | 暨南大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510632 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 dual rmce tcr 基因 置换 系统 及其 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种基因置换系统进行基因置换方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 构建含有置换组件Loxp-GFP-FRT逆转录病毒整合载体pMP71-LGFPF；
S2. 构建含有目标TCR基因的置换载体pDRAV-3-LTCRF；
S3. 将逆转录病毒整合载体pMP71-LGFPF转导入哺乳动物细胞中，筛选并获得单克隆细胞，再将含有TCR基因置换载体和Cre/Flp重组酶载体pDIRE-iCre/Flpo共转入所述单克隆细胞中；
其中，S3所述哺乳动物细胞选自人T细胞系；
S3所述单克隆细胞的筛选过程为：将逆转录病毒载体pMP71-LGFPF导入293T细胞中进行病毒包装，待病毒滴度为5×107时，按照病毒数：细胞数为1：10的比例转导入人T细胞系中，通过G418抗性和绿色荧光蛋白筛选获得单克隆。
2.根据权利要求1所述的TCR基因置换方法，其特征在于，S1的操作为：用SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所述引物从pSR-GFP/Neo扩增
3.根据权利要求1所述的TCR基因置换方法，其特征在于，S2的操作为：用SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所述引物扩增MAGE A1-TCR-1367基因，酶切后连接于pDRAv-3上。
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