[发明专利]一种测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠浓度的方法

说明书

技术领域

本发明属医学检验领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠(STS)浓度的方法。

背景技术

现有技术公开了丹参酮IIA磺酸钠(Sodium Tanshinone IIA Sulfonate，STS)在临床上用于治疗冠心病、心绞痛，心肌梗死等心血管疾病。尽管丹参酮IIA磺酸钠(STS)应用于临床已超过30年，但实践显示其临床用药参考资料依然不足，如人体药代动力学参数未见报道，致使限制了其在临床上安全、有效应用。STS人体药代动力学参数缺乏的重要原因之一是缺乏测定人血浆中STS浓度的方法。迄今，国内外尚未见测定人血浆中STS的分析方法的文献报道。

现有技术的测定STS在动物血浆样本中浓度的方法在灵敏度、定量线性范围、特异性等方面均不适用于测定其在人血浆中的浓度。有文献报道一种反相离子对色谱法(Ion-Pair Reversed-Phase HPLC-UV)测定STS在大鼠血浆中浓度的方法，该方法的最低定量限是0.5μg/mL，显然其灵敏度之低不能满足人血浆中STS低浓度点的测定要求；另有报道采用液相色谱-串联质谱法(Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry)测定大鼠血浆中STS的方法，该方法的定量线性范围为1-500ng/mL，实际上，其中的大鼠静脉注射后的最高血药浓度高达10000ng/mL，远远超过了方法学的验证范围，测定结果不准确；此外，由于动物血浆的基质不同于人血浆基质，并且人血浆中常有合并用药的情况，因此，测定动物血浆的分析方法在特异性上也不能满足人血浆样品的测定要求；还研究公开STS在血浆中不稳定，可能与光照等因素有关，但未对此进行方法学验证，而保证STS在分析过程中的稳定性是保证其人血浆浓度测定方法准确度的关键。

鉴于现有技术存在的问题，本申请的发明人拟提供一种测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠浓度的方法。

发明内容

本发明的目的是克服有技术存在的缺陷，提供一种简便、快速、灵敏、可测定人体血浆中丹参酮IIA磺酸钠血药浓度的方法。

本发明的测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠浓度的方法，采用与现有的技术不同的实验方法，针对测定物进行了实验条件优化：采用结构类似物为内标；样品预处理过程采用了无紫外线黄光安全灯(去除420nm以下波长的光线)条件下进行，控制STS降解；采用了不同的分析色谱柱，以高强度硅胶颗粒C18为色谱柱填料，优化了流动相条件；采用甲酸铵缓冲盐溶液(含0.3-0.5mmol/L甲酸铵，10-20ppm甲酸)和乙腈的混合液作为流动相，等度洗脱。本方法无需特殊的设备和试剂，具有操作简便、快速、血浆用量少、成本低等优点，适合常规血药浓度监测。

具体而言，本发明提供了一种测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠浓度的方法，其特征是，待测样品经简单预处理后，在酸性流动相下，经色谱柱分离，用串联质谱检测，包括以下步骤：

1)样品预处理

取待测样品于离心管中，加入内标工作液、一定浓度的甲酸水溶液和定量的有机溶媒沉淀蛋白，混旋，15000rpm离心后，吸取上清液，加含0.1％甲酸的50％甲醇水溶液，混匀，4℃待测；

本发明中，所述的内标为氘5-脱去氢表雄酮硫酸钠盐(DHEAS-D5)，蛋白沉淀剂甲酸溶液浓度为5～15％，有机溶媒为甲醇、乙腈的混合物；

样品处理在无紫外线黄光安全灯(去除420nm以下波长的光线)条件下进行，能控制STS降解，保证准确度；

2)样品分离

采用通用型的液相色谱柱，其填料为高强度硅胶颗粒C18，高效液相系统采用通用型高压泵和进样器，采用甲酸铵缓冲盐溶液和乙腈的混合液作为流动相，等度洗脱，

所述的甲酸铵缓冲盐溶液中含0.3-0.5mmol/L甲酸铵，10-20ppm甲酸；

本发明的一个实施例中，优选等度洗脱模式为甲酸铵缓冲盐溶液(含0.3-0.5mmol/L甲酸铵，10-20ppm甲酸)∶乙腈为60±10∶40±10，V/V；

3)样品检测

采用通用型串联质谱检测器检测丹参酮IIA磺酸钠和内标的峰面积；

质谱电离方式：电喷雾离子源；极性：负离子检测；扫描方式：多反应离子检测扫描(MRM)；离子通道选择：STS：373.3→357.1amu，DHEAS-D5：373.0→97.8amu；碰撞气：氮气；