[发明专利]一种测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠浓度的方法

权利要求书

1.一种测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠浓度的方法，其特征在于，待测样品经预处理后，在酸性流动相下，经色谱柱分离，用串联质谱检测，包括以下步骤：1)样品预处理

取待测样品于离心管中，加入内标工作液、经甲酸酸化后加入定量的有机溶媒沉淀蛋白，混旋，15000rpm离心后，吸取上清液，加含0.1％甲酸的50％甲醇水溶液，混匀，4℃待测；其中，采用氘5-脱氢表雄酮硫酸钠盐DHEAS-D5为内标；采用无紫外线黄光安全灯条件控制STS降解；所述甲酸为蛋白沉淀剂，其溶液浓度为5～15％；

2)样品分离

采用通用型的液相色谱柱，其填料为高强度硅胶颗粒C18，高效液相系统采用通用型高压泵和进样器，采用甲酸铵缓冲盐溶液和乙腈的混合液作为流动相，等度洗脱；等度洗脱模式为甲酸铵缓冲盐溶液：乙腈为60±10∶40±10，V/V；3)样品检测

采用通用型串联质谱检测器检测丹参酮IIA磺酸钠和内标的峰面积；

质谱电离方式：电喷雾离子源；极性：负离子检测；扫描方式：多反应离子检测扫描(MRM)；离子通道选择：STS：373.3→357.1amu，DHEAS-D5：373.0→97.8amu；碰撞气：氮气；

浓度计算

采用串联质谱法以样品浓度为X轴，STS峰面积(As)和内标峰面积(Ai)的比值为Y轴，进行加权回归分析，采用标准曲线法获得未知血样的浓度值。

2.根据权利要求1所述的测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠药物浓度的方法，其特征在于，所述的步骤1)中，所述的有机溶媒为甲醇、乙腈的混合物。

3.根据权利要求1所述的测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠药物浓度的方法，其特征在于，所述的步骤2)中，所述甲酸铵缓冲盐溶液含0.3-0.5mmol/L甲酸铵，10-20ppm甲酸。

4.根据权利要求1所述的测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠药物浓度的方法，其特征在于，所述的步骤2)中，

仪器参数设定为：扫描间隔：5±1ms；离子源参数：GS1：60±10psi；GS2：60±10psi；气帘气：25psi±10；喷雾电压：-4500±500V；毛细管温度：550±100℃；STS和DHEAS-D5的碰撞能量：50±10eV；运行时间:3±1min.。

5.根据权利要求1所述的测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠药物浓度的方法，其特征在于，所述的步骤3)的串联质谱法中，采用电喷雾离子源和负离子多反应离子检测扫描，离子通道373.3→357.1amu检测STS的峰面积，373.0→97.8amu检测DHEAS-D5的峰面积，用标准曲线方程换算成浓度。

6.根据权利要求5所述的测定人血浆中丹参酮IIA磺酸钠药物浓度的方法，其特征在于，所述的步骤3)中，以样品浓度为X轴，STS峰面积(As)和内标峰面积(Ai)的比值为Y轴，进行加权回归分析，获得的未知血样的浓度值在标准曲线范围内。