[发明专利]一种植物根特异性启动子及其应用

权利要求书

1.一种大麦根特异性启动子，其特征在于，该启动子是如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：

1)由序列表中序列1所示的脱氧核糖核苷酸组成的DNA分子；

2)由序列表中序列2所示的脱氧核糖核苷酸组成的DNA分子；

3)与1)或2)限定的DNA序列杂交的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA序列有90％以上的同源性且能调控目的基因在植物的根中特异表达的DNA分子。

2.根据权利要求1所述的启动子，其特征在于能有效驱动外源基因在植物根中特异性表达，所述启动子克隆方法的步骤如下：

根据HvTIP2；1基因的mRNA转录起始位点上游序列，设计两条上游引物1310F1(5′-AAGCTTCGAAGGAAAGGCATTAGAAA-3′)和1310F2(5′-AAGCTTCTGCATTATCAGACAGAACT-3′)以及一条共用的下游引物1310R(5′-CCATGGTGCGGATGATTACCACAA-3′)，并在上、下游引物5'端分别引入Hind III和Nco I限制性内切酶位点；

以大麦基因组DNA为模版，利用上游引物分别与下游引物组成的引物对，通过PCR方法扩增两条不同长度的启动子片段。

3.根据权利要求2所述的启动子，其特征在于，所述PCR反应体系为：模板DNA 500ng，上、下游引物(10μM)各1μl，10×PCR Buffer(Mg²⁺plus)2μl，dNTP Mixture(2.5mM)1.6μl，Ex-Taq DNA聚合酶(5U/μl)0.2μl，加双蒸水至20μl。PCR程序为：98℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃90s，35个循环；72℃延伸10min。

4.根据权利要求2所述的启动子，其特征在于，所述启动子克隆方法进一步包括PCR产物的回收与质粒重组，具体为：PCR扩增产物经2％的琼脂糖凝胶电泳分离，将目的条带的回收产物与pMD19-T载体连接，将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，经蓝白斑筛选获得阳性克隆。

5.一种含有权利要求1-4任意一项所述启动子的表达盒和表达载体。

6.一种含有权利要求1-4任意一项所述启动子在培育目的基因根特异性表达植物中的应用。

7.一种含有权利要求1-4任意一项所述启动子在转基因植物新品种培育中的应用。