[发明专利]一种基于尿中本胆烷醇酮检测新型睾酮兴奋剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于尿中本胆烷醇酮检测新型睾酮兴奋剂的方法，属于医学检测领域。

背景技术

反兴奋剂技术的进步保障了竞技体育的健康持续发展，兴奋剂检测的实施必须严格遵循世界反兴奋剂机构(World Anti-Doping Agency,WADA)公布的禁用物质检测规则。

睾酮是经常被使用的一种内源性类固醇兴奋剂。人体自身所分泌的睾酮与药用睾酮化学结构相同，但研究表明，药用睾酮与人体分泌的睾酮的碳元素同位素比(¹³C/¹²C，单位为‰)不同。药用睾酮的¹³C/¹²C值低于-27‰，而人体自身分泌的睾酮,¹³C/¹²C值范围为-16.7‰至-25.8‰，当人体服用药用睾酮后，¹³C/¹²C值会降低。因此，WADA规定使用同位素比质谱(Isotope ratio mass spectrometry,IRMS)测定碳元素同位素比值(¹³C/¹²C，单位为‰)，以区分人体分泌的睾酮与体外摄入的药用睾酮，气相色谱/燃烧炉/同位素比质谱(gas-chromatography/combustion/isotope ratio mass spectrometry，GC/C/IRMS)可测定同位素比，以δ值(‰)表示。

现有研究表明，在碳3位上¹³C标记的睾酮有商品出售，它与药用睾酮混合后可以组成一种新型睾酮兴奋剂，当使用此种新型睾酮兴奋剂后，¹³C/¹²C值(δ值)落入人体分泌的睾酮的¹³C/¹²C值(δ值)范围内。因此，已有的检测方法无法检测这种新型睾酮兴奋剂了。

目前，有基于雄酮的方法用于此种新型睾酮兴奋剂的检测。但是当人体摄入多种药物，会导致尿样成分的多样性及复杂性。此时检测尿样中雄酮时，因干扰因素的存在，会影响检测结果。因此，对此种新型睾酮兴奋剂应该开发新的检测方法，以适应不同的检测情况。

本胆烷醇酮(Etiocholanolone)，别名：还原尿睾酮，5β-androstan-3α-ol-17-one，分子式：C₁₉H₃₀O₂，为睾酮在人体内的代谢产物，在尿液中与葡萄糖醛酸结合，生成本胆烷醇酮葡萄糖醛酸甙，被排出体外，本胆烷醇酮的结构如下：

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于尿中本胆烷醇酮检测新型睾酮兴奋剂的方法，用于新型睾酮兴奋剂的检测，本方法检测灵敏，准确性高。

本申请发明人经过研究发现，尿样中本胆烷醇酮葡萄糖醛酸甙浓度较大，灵敏度较高，与其它代谢物相比具有较便捷的操作性，并且它是睾酮在人尿中的代谢产物，可以用于新型睾酮兴奋剂的检测，检测的关键在于将尿样中高灵敏度的本胆烷醇酮提取出来，并将其分子中C-3位标记的¹³C消除，生成新化合物A-失碳-5β-雄甾烷-2，17-二酮(A-nor-5β-androstane-2,17-dione)。本申请发明人经研究证实，消除3位碳前后的两个化合物的¹³C/¹²C值(δ值)产生较大差异，利用此特性可以检测新型睾酮兴奋剂。

本申请发明人经研究发现，将尿样中本胆烷醇酮反应生成A-nor-5β-androstane-2,17-dione的方法中，操作条件十分重要，为了得到高产率的新化合物A-nor-5β-androstane-2,17-dione，需严格遵守所用化学试剂、化学试剂用量和操作步骤。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种基于尿中本胆烷醇酮检测新型睾酮兴奋剂的方法，包括：