[发明专利]与人鼻咽癌LMP2A结合的适配子及其构成的生物芯片

说明书

技术领域

本发明属于生物领域，具体的说，涉及一种与人鼻咽癌LMP2A具有特异性结合的适配子及构成的生物芯片。

背景技术

鼻咽癌是来源于鼻咽上皮的高度恶性肿瘤，肿瘤进展极易侵犯颅底等重要结构，并较早发生颈部淋巴结转移和远处转移。鼻咽癌表现为种族和地区分布的特点，是我国十大高发恶性肿瘤之一，其发病率为20/100,000，已引发严重健康问题。鼻咽癌是由Epstein-Barr病毒(EBV)的潜伏感染、环境因素和宿主的基因遗传因素共同参与的多步骤交互作用而逐步形成的复杂性疾病。所有的鼻咽癌细胞都含有EBV基因组，并表达EBNA1，EBERl, EBER2，和LMP1，LMP2A，LMP2B，这使得这些病毒蛋白成为理想的肿瘤标志物，其中latent membrane protein2A (LMP2A)在鼻咽上皮细胞的转化、癌变和复发的过程中的作用倍受关注，是目前公认的病毒癌基因。它以其独特的蛋白分子结构参与鼻咽癌发生和发展的全过程。

SELEX 技术，又指数富集配体的系统进化（systematic evolution of ligands byexponential enrichment, SELEX)是20世纪90年代发展起来的一项组合化学技术。DNA配体与RNA配体的筛选过程虽然有一点不同，但一般都包括以下几个步骤：（1)通过人工合成，建立dsDNA随机序列库。⑵与靶物质反应，筛选出相互结合的靶物质-核酸复合体。(3)将筛选到的蛋白-核酸复合物分离，得到的核酸进行PCR扩增，变性成单链以准备进行下一轮筛选，筛选的次数由文库的类型和每次循环所得特异性序列的富集程度决定。(4)经过若干轮筛选得到的、能高度结合靶物质的核酸配体可以进行测序并用于各种研究工作。具有库容量大，靶分子范围广，亲和力强等优点，应用十分广泛。与传统检测技术中的抗体相比，寡核苷酸适配子还具与靶分子结合力更强、稳定性好、精确性高、重复性好、可反复使用、可长期保存、可进行精确的位点修饰、筛选期更短等优势，是一种高效、快速的检测手段。

近年来表面等离子体共振（surface plasmon resonance, SPR)技术因其具有实时监测反应动态过程、灵敏度较高、无需标记、无背景干扰、成本低廉等特点，被认为是生物分子检测的理想检测器件，已经成为临床实验诊断领域研究的热点。基本原理是一种物理光学现象。表面等离子体（SP)是沿着金属和电介质间界面传播的电磁波形成的。当平行表面的偏振光以称之为表面等离子体共振角入射在界面上，发生衰减全反射时，入射光被耦合入表面等离子体内，光能大量被吸收，在这个角度上由于表面等离子体共振引起界面反射光显著减少。由于SPR对金属表面电介质的折射率非常敏感，不同电介质其表面等离子体共振角不同。同种电介质，其附在金属表面的量不同，则SPR的响应强度不同。基于这种原理的生物传感器通常将一种具特异识别属性的分子即配体固定于金属膜表面，监控溶液中的被分析物与该配体的结合过程。在复合物形成或解离过程中，金属膜表面溶液的折射率发生变化，随即被SPR生物传感器检测出来。与传统的ELISA检测法相比，SPR生物传感器具有如下显著特点：（I)实时检测，能动态地监测生物分子相互作用的全过程；（2)无需标记样品，保持了分子活性；（3)样品需要量极少；(4)检测过程方便快捷，灵敏度高；(5)应用范围非常广泛；(6)高通量、高质量的分析数据；（7)大多数情况下，不需对样品进行预处理；（8)能检测混浊的甚至不透明的样品。现在已广泛用于物理量检测，化学检测与生物监测。

如果能筛选出鼻咽癌LMP2A的适配子，然后将其包被在生物芯片上，再结合SPR生物传感器进行检测，将非常的快捷和精确。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的之一在于提供一种与鼻咽癌LMP2A结合力更强、稳定性好、精确性高、重复性好的适配子。

本发明目的之二在于提供一种与鼻咽癌LMP2A具有特异性的适配子所构成的生物芯片。

本发明目的是这样实现的：一种与鼻咽癌LMP2A具有特异性的适配子，其特征在于：他具有SEQ ID No. 1-SEQ ID No. 13的序列之一。

一种由与鼻咽癌LMP2A具有特异性的适配子构成的的生物芯片，包括玻璃基底（I)，玻璃基底（I)上依次附着有金膜（2)、连接层（3)和表面基质（4)，所述金膜（2)的流池包被有SEQ ID No. 1-SEQ ID No. 13序列的适配子。