[发明专利]PSMD4蛋白的ELISA检测试剂盒及其检测方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学和生物技术领域，具体涉及一种PSMD4蛋白的ELISA检测试剂盒及其检测方法与在肝癌血清学诊断中的应用。

背景技术

原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我国最常见恶性肿瘤之一，每年新发病例约占全球50％。由于肝癌出现症状时多属中晚期，切除后复发、转移率高。因此，肝癌的早期诊断对延长患者的生存时间和降低肝癌死亡率具有重要意义。

目前肝癌的诊断主要依靠实验室检查、影像学检查以及肝穿刺组织学检查。影像学诊断在肝癌诊断中起重要作用，但在诊断小于2公分的小肝癌及区分良恶性结节方面具有一定的局限性。有创的组织病理学检查是诊断肝癌的金标准，但细针穿刺因取材有限而有较高的假阴性率，并且有使肿瘤扩散和针道种植的风险。临床上，血清甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)是目前唯一广泛应用的HCC标志物。但是近年研究报道，以AFP诊断HCC的阳性率仅为60％-70％，在小肝癌中敏感性更低，容易造成漏诊；其次在一些良性肝病、生殖性畸胎瘤等患者中也可有升高，容易造成误诊。因此，临床仍需要高度敏感的血清肝癌特异标志物来鉴别肝脏良恶性病变，或在高危人群进行随访提高肝癌的早期诊断率。

HCC血清标志物的研究一直是科学家们研究的重点，但大多数研究成果难以满足实际应用的需要。探索高敏感性及特异性的血清学指标尤为重要。

本发明中的研究对象—PSMD4蛋白，是一个蛋白酶体26S非ATP酶亚基4(GeneID:5710)。该分子含有两段15个氨基酸的泛素相互作用模序(ubiquitin interactingmotif,UIM)，能够选择性结合泛素化蛋白，介导蛋白质降解。已有研究报道，PSMD4异常表达与炎症性肠病、溃疡性结肠炎等疾病相关，PSMD4在肝癌中的表达及生物学功能尚不十分清楚。有研究显示，PSMD4可能与细胞分化和机体发育有关(参见文献：Smalle,J,et al.The pleiotropic role of the 26S proteasome subunit RPN10 in Arabidopsis growth and development supports a substrate-specific function in abscisic acid signaling.Plant Cell,2003.15(4):p.965-80.；Szlanka,T,et al.Deletion of proteasomal subunit S5a/Rpn10/p54 causes lethality,multiple mitotic defects and overexpression of proteasomal genes in Drosophila melanogaster.J Cell Sci,2003.116(Pt 6):p.1023-33.；Hamazaki,J.,et al.,Rpn10-mediated degradation of ubiquitinated proteins is essential for mouse development.Mol Cell Biol,2007.27(19):p.6629-38)。我们发现PSMD4是一个重要的肝癌癌蛋白，并且可以释放入血。本申请人已就PSMD4作为肝癌预后诊断标志物的新用途申请了中国专利CN201310005491.4，发明名称为“PSMD4蛋白在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用”，公开号为CN103091493A。

目前尚无文献报道在肝癌血清样品中准确检测到PSMD4蛋白；也尚无针对肝癌血清样品中的PSMD4蛋白含量提供一种准确、简便、灵敏度高的检测手段；也尚无文献报道PSMD4蛋白的ELISA检测试剂盒以及该类试剂盒在肝癌血清学诊断中的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种PSMD4蛋白的ELISA检测试剂盒；本发明的另一目的是提供利用上述试剂盒的检测方法；本发明的第三目的是提供上述试剂盒在肝癌血清学诊断中的应用。

本发明旨在为临床和实验室肝癌血清样品中PSMD4蛋白含量提供准确、简便、灵敏度高、并可被广泛使用的检测手段。

本发明人经过广泛而深入的研究，采用酶联免疫吸附法检测PSMD4蛋白在肝癌病人血清中的表达水平，并首次证实在肝癌病人的血清中存在PSMD4蛋白。

本发明第一方面，提供了一种PSMD4蛋白的ELISA检测试剂盒，所述的ELISA检测试剂盒包括：