[发明专利]一种无DMSO的冷冻保护剂与冷冻保存卵巢的方法在审
| 申请号： | 201510426309.1 | 申请日： | 2015-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN105052892A | 公开（公告）日： | 2015-11-18 |
| 发明（设计）人： | 迟令龙;李栋 | 申请（专利权）人： | 山东省齐鲁干细胞工程有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 刘丽 |
| 地址： | 250102 山东省济南市*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 dmso 冷冻 保护 保存 卵巢 方法 | ||
1.一种无DMSO的冷冻保护剂，其特征在于含有以下组分：
海藻糖200mmol/L，PVP400.3g/mL，胆固醇200ug/L，卵磷脂200ug/L。
2.根据权利要求1所述的冷冻保护剂，其特征在于还含有胎牛血清0.1g/mL和RMPI-1640。
3.根据权利要求1所述的冷冻保护剂，其特征在于将海藻糖、PVP40、胆固醇、卵磷脂、胎牛血清和RMPI-1640混合制成无菌悬浊液。
4.一种冷冻保存卵巢的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）灌注：对新采摘卵巢，通过卵巢动脉插管并行丝线固定，结扎卵巢动脉分支后，与灌注装置相连，启动装置以0.5-5mL/min的速率，向卵巢灌注权利要求1-3中任一项所述的冷冻保护剂，灌注时长共计10-60min；
（2）冻存：灌注后，将卵巢表面任何肉眼可见的卵泡穿刺，抽吸去除内容物，然后将卵巢放入装有相应权利要求1-3中任一项所述的冷冻保护液的冷冻袋中，进行降温，设定为①4℃平衡，②以1℃/min的速度降至0℃，并保持10min，③以2℃/min的速度降至-18℃，保持15min，④以2℃/min速度降至-45℃，保持15min，⑤再以5℃/min的速度降至-90℃，保持5min，随后投入液氮中存放。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于步骤（1）中灌注速率为1.3mL/min，灌注时长30min。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述卵巢为羊卵巢。
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