[发明专利]一种宝兴百合组培快繁和离体保存方法

说明书

技术领域：

本发明涉及植物生物技术领域，具体地，涉及植物宝兴百合(Lilium duchartrei Franch.)的组培快繁和离体保存方法。

背景技术：

宝兴百合(Lilium duchartrei Franch.)为百合科百合属植物，中国特有，主要分布于我国四川、云南、西藏和甘肃等省区，生于海拔2300-3500米的高山草地、林缘或灌木丛中。宝兴百合是亚洲产百合种类中唯一具香味、花白色、花瓣反卷的野生种类。宝兴百合以鳞茎入药，润肺止咳，清热安神，可用于治疗肺结核，慢性支气管炎等症。宝兴百合是培育香花型百合品种的潜在亲本，不仅是百合育种研究中的优异种质材料，而且其自身也具有极大的商业开发潜力。我国百合属植物资源丰富，是世界百合育种重要的亲本来源。百合属植物组培繁殖相关工作已有报道，但大多集中在具有观赏价值的园艺品种或杂交种。目前，针对我国的野生百合种质资源组培繁殖和离体保存方面的工作有很少报道。其中如专利公开号为CN104663458A的关于川百合的组培快繁，CN102204512B的关于细叶百合的组培快繁的报道，这两种野生百合的组培繁殖强度也较大，在不定芽诱导方面采用了不同的培养基。宝兴百合虽已有组培快繁和离体保存方面的探索，但在增殖情况和离体保存继代周期方面仍不尽如人意，如，傅伊倩(2012，几种野生百合离体保存技术的研究)以宝兴百合的叶片为外植体，在MS+NAA2.0mg/L+TDZ 0.2mg/L培养基中，其增值系数仅为3.29，在1/2MS+NAA 0.5mg/L+活性炭2g/L的离体保存培养基中，继代周期也仅为1个月。为使宝兴百合这一中国特有的野生种质资源能实现人工大规模繁殖，实现更加有效的离体保存，节省人力物力，需要提供一种宝兴百合更有效率的组培快繁和离体保存方法。

发明内容：

本发明的目的在于提供现有技术中未有的一种中国特有、极具观赏和药用潜力的植物宝兴百合的组培快繁和离体保存方法。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

宝兴百合(Lilium duchartrei Franch.)的组培快繁和离体保存方法，取宝兴百合的中层鳞片进行消毒后，接种在不定芽诱导和增殖培养基上，获得小鳞茎后，转接到可使鳞茎增大及生根的培养基中，经过炼苗处理后，即可移栽。去除长根且增大的鳞茎的根和叶，置于离体保存培养基中，在低温条件下培养，离体保存周期可延长至4年。

上述方法的不定芽诱导和增殖培养基为(1)MS+BA 0.5mg/L+2,4-D 1.0mg/L；(2)鳞茎增大及生根培养基：MS+PPP₃₃₃2.0mg/L+NAA 0.5mg/L；(3)离体保存培养基：MS+PPP₃₃₃0.3mg/L+BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L+TDZ0.06mg/L。以上培养基(1)和(3)添加蔗糖20g/L，(2)添加蔗糖90g/L，(2)和(3)添加活性炭1-2g/L。所有培养基均添加琼脂5.6g/L固化，pH5.8，除离体保存培养条件为13±2℃外，其余培养温度均为25±2℃，光照强度10-20μmol/(m²·s)，光照12h/d。