[发明专利]培养原代海马神经元的方法

说明书

本发明公开了培养原代海马神经元的方法，该方法包括：(1)将海马组织进行消化处理；(2)将经过消化处理的海马组织进行吹打分散处理，获得细胞悬液；(3)将细胞悬液接种并进行第一培养2‑4小时，使细胞贴壁；(4)将培养皿中的第一培养液更换为第二培养液，进行第二培养24小时；(5)向培养皿中添加1～2μg/ml的阿糖胞苷，进行第三培养24小时；(6)利用第二培养液对所述培养皿进行半量换液，进行第四培养至少3天，期间每周半量换液2次，以便获得原代海马神经元。利用该方法能够快速、高效地制备获得原代海马神经元，并且获得的原代海马神经元细胞极其适于用作膜片钳实验的细胞模型。

技术领域

本发明涉及培养原代海马神经元的方法。

背景技术

膜片钳技术是在电压钳技术的基础上发展起一种新技术，现已成为研究离子通道的“金标准”，该技术广泛应用于研究离子通道门控动力学、生理功能、药理学特性及结构与功能关系等方面。原代大鼠海马神经元是一种在离体水平上研究神经元电生理活动的重要细胞模型。而状态优良的原代大鼠海马神经元是膜片钳实验成功的重要先决条件，其对膜片钳记录中的封接和破膜极其重要。

目前，关于原代大鼠海马神经元的培养方法包括有血清培养和无血清培养两种，最新的研究多以无血清培养方法为主，但无血清培养的海马神经元细胞细胞膜脆性较大，破膜后易发生形变，不利于膜片钳等电生理信号的记录，因而不适用于膜片钳实验。因此，目前急需建立一种适合于膜片钳实验的原代神经元培养方法。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种适合于膜片钳实验的原代神经元培养方法。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种培养原代海马神经元的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：

(1)将海马组织进行消化处理，以便获得经过消化处理的海马组织；

(2)将所述经过消化处理的海马组织进行吹打分散处理，并加入第一培养液，重悬细胞，以便获得细胞悬液；

(3)将所述细胞悬液接种至多聚赖氨酸包被的培养皿中，进行第一培养2-4小时，使细胞贴壁；

(4)将所述培养皿中的所述第一培养液更换为第二培养液，然后进行第二培养24小时；

(5)向所述培养皿中添加1～2μg/ml的阿糖胞苷，然后进行第三培养24小时；

(6)利用所述第二培养液对所述培养皿进行半量换液，然后进行第四培养至少3天，期间每周半量换液2次，以便获得原代海马神经元。

发明人惊奇地发现，利用本发明的方法能够快速、高效地制备获得原代海马神经元，并且，获得的原代海马神经元细胞活性好，生理状态佳，示神经元突起丰富并交联成网状，胞体表面光滑，折光性强，立体感强，细胞膜韧性好，用于膜片钳实验时，破膜后细胞不易发生形变，因而尤其适于用作膜片钳实验的细胞模型。

另外，根据本发明上述实施例的培养原代海马神经元的方法还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的实施例，所述海马组织是以温度为4摄氏度的DMEM培养基为解剖液，从离体非人哺乳动物大脑中剥离获得的。由此，有利于维持海马神经元细胞的活性和生理状态，后续培养效果好。

根据本发明的一些优选实施例，所述非人哺乳动物为大鼠。

根据本发明的实施例，步骤(1)进一步包括：将所述海马组织切成1～2mm³的组织块；于37℃下，利用0.25％的胰蛋白酶液将所述组织块进行消化处理20min；以及利用胎牛血清终止消化。由此，消化处理效果好，且不影响细胞的生理状态和活性，有利于后续培养的进行。

根据本发明的实施例，步骤(2)进一步包括：