[发明专利]一种镉‑高密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及重金属离子的免疫学检测，具体涉及一种镉-高密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用。

背景技术

脂蛋白(lipoproteins)是蛋白质与脂质结合所形成的一种脂质-蛋白质复合物，按密度分为高密度脂蛋白(high density lipoprotein，简称HDL)、中间密度脂蛋白(intermediate density lipoprotein，简称IDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，简称LDL)、极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,简称VLDL)、乳糜颗粒(chylomiCdon，CM)。血液中大约百分之三十的胆固醇是通过高密度脂蛋白从组织细胞中运输到肝脏转化为胆汁酸或通过胆汁排出体外的。高密度脂蛋白由50％的蛋白、30％的磷脂、25％的胆固醇(其中70％为胆固醇酯)、5％的三酰甘油组成。

高密度脂蛋白(简称HDL)是血浆中主要脂蛋白之一，其密度最高，颗粒直径最小，蛋白和脂质含量大致均等的异质性脂蛋白。由50％的蛋白、30％的磷脂、25％的胆固醇(其中70％为胆固醇酯)、5％的三酰甘油组成。

HDL是动脉粥样硬化发生和发展的主要脂类保护因素，其在血清蛋白中有很强的抑制动脉粥样硬化作用，是冠状动脉疾病的重要保护因子，与冠心病危险程度呈负相关。

镉是一种常见的有毒金属及环境污染物，广泛应用于工业生产环境中，包括电镀、制造工业颜料、塑料稳定剂、镍铬电池等，与人们生活息息相关。对于普通人群，主要是通过吸入镉污染的空气，及食用含镉污水灌溉农田生产的农作物(如含镉大米)等方式摄入镉。研究表明，镉是一种全身性毒物，可引起人和动物的肺、肝、肾等多种器官以及心血管、免疫、神经等多系统功能损伤，还具有较强的致癌作用。1993年国际肿瘤研究机构(IARC)已将镉及其化合物列为第1类人致癌物。可见镉对机体的影响及其重要，不可忽视。

目前已有大量的文献证实镉可以作用于全身各个系统中的蛋白，从而影响机体各组织器官的机能。众所周知，高密度脂蛋白是一种特殊意义的蛋白质，镉是否可以作用于高密度脂蛋白，而使高密度脂蛋白结构改变、含量改变、活性改变、功能改变，这些尚缺乏相关研究。

发明内容

针对镉污染严重的问题，本发明的目的在于提供一种镉-高密度脂蛋白螯合物及其制备方法，并建立镉-高密度脂蛋白螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测镉-高密度脂蛋白螯合物在评价一个地区镉污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中镉-高密度脂蛋白螯合物，可以间接反映这个地区人群受镉污染的情况，从而间接反映这个地区镉污染程度。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种镉-高密度脂蛋白螯合物，该镉-高密度脂蛋白螯合物是镉离子与高密度脂蛋白通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

本发明还提供一种上述的镉-高密度脂蛋白螯合物的制备方法，即体外合成法，包括以下步骤：

A)镉-高密度脂蛋白的合成：在提纯源于人体的高密度脂蛋白或按照生物学方法重组的高密度脂蛋白中加入镉离子进行螯合反应，得到反应溶液；

B)镉-高密度脂蛋白螯合物纯化：采用免疫亲和层析法，去除步骤A)反应溶液中未反应的高密度脂蛋白、特异性抗体和镉离子，即得镉-高密度脂蛋白螯合物。

作为优选，所述步骤B)中具体包括以下步骤：

(1)溶解样品：将上述步骤A)的提取的镉-高密度脂蛋白螯合物溶解于生理盐水中，得镉-高密度脂蛋白螯合物溶液；

(2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与高密度脂蛋白特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；

所述能与高密度脂蛋白特异性结合的填料为吸附有可与高密度脂蛋白特异性结合物质的硅胶或树脂；

(3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(1)所述溶液，然后上柱，使高密度脂蛋白与填料特异性结合；

(4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05-0.10mol/L的Na₂HPO₄溶液进行洗脱；

(5)收集：收集步骤(4)的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原；

(6)透析：将步骤(5)中的收集的洗脱液装透析袋，用ddH₂O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本；