[发明专利]一种铅-高密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及重金属离子的免疫学检测，具体涉及一种铅-高密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用。

背景技术

脂蛋白(lipoproteins)是蛋白质与脂质结合所形成的一种脂质-蛋白质复合物，按密度分为高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)、中间密度脂蛋白(intermediate density lipoprotein，IDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)、极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)、乳糜颗粒。血液中大约30％的胆固醇是通过HDL从组织细胞中运输到肝脏转化为胆汁酸或通过胆汁排出体外的。动脉造影证明高密度脂蛋白胆固醇含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关，故被称为“好胆固醇”，高密度脂蛋白是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病的保护因子，俗称“血管清道夫”，其可以抑制癌细胞的转移扩散，对癌症的防控有重要作用。

但是，研究表明高密度脂蛋白胆固醇的数量并不能与心血管疾病的保护程度成正比，因为其中已经发生结构改变的高密度脂蛋白仍然可以测量到但已经丧失正常功能甚至会加重动脉粥样硬化的进展。而高密度脂蛋白胆固醇的数量下降则可显著提示动脉粥样硬化的保护性减弱，因而检测定量血清中HDL对于冠心病具有重要意义，不仅可以用于早期识别动脉粥样硬化的危险性，而且可以作为脂类调节药物治疗过程的检测以及预后评价的指标之一。

铅是一种常见的有毒金属及环境污染物，广泛应用于工业生产环境中，包括冶炼锻造、铅电池生产、汽油添加剂的生产过滤中等，与人们生活息息相关。对于普通人群，主要是通过吸入铅污染的空气，或饮用以铅壶或铅锡壶盛装的酒，甚至使用或滥用含铅的药物治疗慢性疾病而摄入铅。研究表明，铅是一种全身性毒物，可以影响神经、造血、内分泌、免疫、生殖、肝脏、肾脏等组织器官，国际肿瘤研究机构也将铅及其化合物列为第2B类人致癌物。可见铅对机体的影响及其重要，不可忽视。

目前已有大量的文献证实铅可以作用于全身各个系统中的蛋白，从而影响机体各组织器官的机能。众所周知，高密度脂蛋白是一种特殊意义的蛋白质，铅是否可以作用于高密度脂蛋白，而使高密度脂蛋白结构改变、含量改变、活性改变、功能改变，这些尚缺乏相关研究。

发明内容

针对铅污染严重的问题，本发明的目的在于提供一种铅-高密度脂蛋白螯合物及其制备方法，并建立铅-高密度脂蛋白螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测铅-高密度脂蛋白螯合物在评价一个地区铅污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中铅-高密度脂蛋白螯合物，可以间接反映这个地区人群受铅污染的情况，从而间接反映这个地区铅污染程度。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种铅-高密度脂蛋白螯合物，该铅-高密度脂蛋白螯合物是铅离子与高密度脂蛋白通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

本发明还提供一种上述的铅-高密度脂蛋白螯合物的制备方法，即体外合成法，包括以下步骤：

A)铅-高密度脂蛋白的合成：在提纯源于人体的高密度脂蛋白或按照生物学方法重组的高密度脂蛋白中加入铅离子进行螯合反应，得到反应溶液；

B)铅-高密度脂蛋白螯合物纯化：采用免疫亲和层析法，去除步骤A)反应溶液中未反应的高密度脂蛋白、特异性抗体和铅离子，即得铅-高密度脂蛋白螯合物。

作为优选，所述步骤B)中具体包括以下步骤：

(1)溶解样品：将上述步骤A)的提取的铅-高密度脂蛋白螯合物溶解于生理盐水中，得铅-高密度脂蛋白螯合物溶液；

(2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与高密度脂蛋白特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；

所述能与高密度脂蛋白特异性结合的填料为吸附有可与高密度脂蛋白特异性结合物质的硅胶或树脂；

(3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(1)所述溶液，然后上柱，使高密度脂蛋白与填料特异性结合；

(4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05-0.10mol/L的Na₂HPO₄溶液进行洗脱；

(5)收集：收集步骤(4)的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原；

(6)透析：将步骤(5)中的收集的洗脱液装透析袋，用ddH₂O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本；