[发明专利]一个影响绵羊繁殖性状的NR5A2基因启动子区的分子标记、检测方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一个影响绵羊繁殖性状的NR5A2基因启动子区的分子标记、检测方法及其应用。

背景技术

NR5A基因家族由NR5A1和NR5A2等2个成员组成，在多能性、糖脂稳态平衡和类固醇生成等方面发挥关键作用。研究发现NR5A家族基因敲除的小鼠类固醇生成紊乱，繁殖力明显下降，可见NR5A家族是动物繁殖力的关键调节因子。NR5A2是NR5A家族中发现的第二个成员，在哺乳动物各种生命过程甚至是疾病发生中发挥广泛的调控作用，特别是与哺乳动物雌性生殖、卵泡发育、类固醇生成等关系密切。NR5A2于1993年在人类中首先被发现，其在成年哺乳动物各种组织中均有表达，主要在肝、肠和卵巢等组织中表达，特别是在卵巢中高表达。在卵巢组织中，NR5A2选择性地在颗粒细胞和黄体细胞中表达，而在卵泡膜细胞和间质细胞中不表达。NR5A2基因在牛卵巢优势卵泡和排卵前卵泡颗粒细胞中的转录水平极显著高于小卵泡、黄体细胞，说明NR5A2在哺乳动物卵泡发育和优势化过程中发挥重要的作用。赵永祥发现NR5A2基因在猪卵泡闭锁过程中下调，敲减颗粒细胞中NR5A2基因后，颗粒细胞凋亡率显著增加，说明NR5A2可通过影响卵泡颗粒细胞凋亡来调节哺乳动物卵泡发育和卵泡闭锁。NR5A2基因敲除纯合型(NR5A2^-/-)小鼠在胚胎期6.5-7.5天死亡，杂合型(NR5A2^+/-)小鼠繁殖力明显下降，而颗粒细胞NR5A2特异性敲除(NR5A2^gc-/-)雌性小鼠不育，卵巢组织虽然存在有腔卵泡，但未见黄体，出现排卵障碍，说明NR5A2是哺乳动物卵泡发育和排卵必需的。卵巢黄体细胞特异性敲除NR5A2后引起卵巢功能不全，最终导致妊娠失败，而下丘脑弓状核kisspetin神经元特异性敲除(NR5A2^kiss-/-)小鼠可显著降低产仔数。赵永祥发现猪卵泡中NR5A2基因表达水平与卵泡液中E2含量呈极显著正相关，而敲减颗粒细胞中NR5A2基因后，E2合成通路中关键酶P450scc水平极显著下调。Wu等证实NR5A2可通过与CYP19A1基因启动子区结合调节类固醇生成基因的表达，从而调控哺乳动物卵泡颗粒细胞中E2合成。颗粒细胞特异性敲除(NR5A2^gc-/-)小鼠卵巢组织中STAR等表达下降，P4含量下降，影响黄体化。另外，在卵巢组织中，NR5A2还调控CYP11A1、STAR、HSD3B2、INHA、FDX1等卵泡发育相关基因的表达，而在垂体中NR5A2在前叶中表达，可调控GnRHR、LHβ和FSHβ等卵泡发育关键基因的表达。

湖羊是我国唯一的南方绵羊品种，在我国低繁殖力绵羊品种改良和新品系培育中做出一定的贡献。绵羊繁殖力性状是一个重要的经济性状，属于数量性状，传统的表型选择准确性低，且表型值需要在母羊成熟产羔后才能逐步表现出来，周期很长，无法进行超早期选择，遗传进展缓慢。

发明内容

本发明的目的是提供一种与湖羊繁殖性状相关的分子位点。

本发明的另一目的是提供一种检测所述的分子标记的引物对。

本发明的又一目的是提供一种筛选具有良好繁殖性状的湖羊的方法。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种与湖羊繁殖性状相关的分子标记，该分子标记包含NR5A2基因启动子区-700位点，该位点具有T/G多态性；所述的NR5A2基因启动子区序列的Genbank登录号为NC_019469.1；GG型和TG型绵羊个体的产仔数显著多于TT型。

所述的繁殖性状包括头胎产仔数、二胎产仔数、三胎产仔数和平均产仔数。

一种用于检测所述的分子标记的引物对，上游引物P1为：SEQ ID NO：2，下游引物P2为：SEQ ID NO：3。

一种检测所述的分子标记的方法，包含利用所述的引物对PCR扩增湖羊基因组DNA，得到575bp扩增产物，利用Hin6I限制性内切酶对所述的扩增产物进行酶切，电泳分型，获得575bp片段的定义为TT型，获得575bp、293bp、282bp三个片段的定义为TG型，获得293bp、282bp两个片段的定义为GG型。

一种筛选具有良好繁殖性状的湖羊品系的方法，包含以下步骤：

1)提取绵羊基因组DNA；

2)利用两条特异性引物PCR扩增NR5A2基因启动子区序列，得到575bp扩增产物；所述的两条特异性引物序列为P1：SEQ ID NO.1，P2：SEQ ID NO.2；