[发明专利]透射光显微镜和用于透射光显微镜检查的方法

说明书

本发明描述了一种透射光显微镜，所述透射光显微镜用于对呈井状的包含液体的样品容器(4)成像，其中所述透射光显微镜(1)具有：照明光束路径(B)，所述照明光束路径(B)用于使用照明光束从上方沿着光轴(OA)照亮样品容器(4)，其中所述照明光束路径(B)具有对准光轴的照明元件(3、15)，所述元件将照明光束照射到样品容器(4)上；成像光束路径(A)，所述成像光束路径(A)用于从下方沿着光轴(OA)对样品容器(4)成像；和吸移管进入通道，所述吸移管进入通道用于将试剂引入样品容器中，其中照明元件(3、15)呈环状并且在光轴(OA)上具有开口(7)，所述吸移管进入通道行进通过所述开口。

技术领域

本发明涉及一种透射光显微镜，其用于对呈井状的包含液体的样品容器成像，其中该透射光显微镜具有：照明光束路径，该照明光束路径用于使用照明光束从上方沿着光轴照亮样品容器；和成像光束路径，该成像光束路径用于从下方沿着光轴对样品容器成像；以及，吸移管进入通道，该吸移管进入通道用于将试剂引入样品容器中。

本发明还涉及一种方法，其用于呈井状的包含液体的样品容器的透射光显微镜检查，其中样品容器使用照明光束沿着光轴从上方被照亮，样品容器沿着光轴从下方被成像，并且试剂经由吸移管进入通道被引入样品容器中。

背景技术

活细胞的显微镜检查在生物医学中起重要作用。它们通常在例如微量滴定板或培养皿的容器中被培养。这些细胞位于容器的底部并且被培养基围绕。它们使用倒置的显微镜经受显微镜检查；在该显微镜中，物镜位于样品容器的底部之下。样品可以经由入射光或透射光被照亮。对于透射光图像，光附加在样品容器上方。然而，由于生物细胞仅包含很少的吸收性成分，所以明视野的透射光图像通常仅非常弱地被对比。借助于各种透射光对比方法，例如相位对比，尤其是DIC，个体细胞成分彼此之间的折射率的微小差异以及与周围培养基之间的微小差异可以被转换成光强(intensity，强度，亮度)差，该光强差然后提供对比的透射光图像，但是从该图像中通常仅很少的部分可以被认为是关于细胞中的特定物质的功能或分布。荧光显微镜检查通过特定物质(荧光素)解决了该问题，该特定物质已经可被细胞获得或者已经被引入到借助于入射光照明而被激活的细胞中，所述荧光素然后依次发出信号，该信号被物镜捕获并且传输到照相机或目镜。然而，因为仅荧光素被激活的那些结构可以被看到，因而关于个体细胞的尺寸和形状的信息可能丢失。因此，由于入射光和透射光提供互补的信息，因而入射光和透射光频繁地被组合使用。

由于活细胞是活着的，因而活细胞并非静止的物体，而是一直在变化。特别地，活细胞可以作为研究对生物体的环境影响的效果的对象。这些影响还包括营养培养基的材料成分。如果材料成分改变，则细胞对此作出反应。反应时间可以落在分钟和小时的范围内，但是也可以落在秒的范围内。因而可能极为重要的是，在细胞环境改变之后或甚至在该改变过程中，立即进行观察。环境的改变通常通过将物质吸移进入培养液中而被实现，该物质的影响将被研究。由于样品容器在顶部处开口，因而试剂也被从顶部引入。因而，有意地形成了与透射光照明装置在空间上的冲突。

有多种解决该矛盾的可能性，每种都具有它自己的特定优点和缺点。US2012/0034596描述了一种装置，在该装置中，样品容器可以在保持器中从试剂可以被引入的一个区域被输送到用于显微镜检查的光学元件所位于的另一区域中。试剂然后在样品容器的任何点处直接从上方引入。该方法的缺点是，样品需要在被引入和被观察之间移动较大距离，并且细胞的在引入之后立即发生的反应不能被检测到。此外，通常地，在试剂的引入之前需要对照图像，即样品上适合于显微镜检查的位置必须首先被发现，然后样品容器行进至引入发生的位置，然后再返回。这导致样品的多个运动，这也意味着产生细胞的应力并且可能导致与试剂的实际引入无关的反应。