[发明专利]一种采用超滤法辅助硫酸铵盐析提取乳过氧化物酶的方法

权利要求书

1.一种采用超滤法辅助硫酸铵盐析提取乳过氧化物酶的方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)硫酸铵盐析法分级提取乳过氧化物酶：

除去新鲜的牛乳中的脂肪和酪蛋白后得到乳清，在室温条件下，向乳清中添加25-85％饱和度的硫酸铵，离心，去除沉淀，置于搅拌器上不断搅拌使硫酸铵充分溶解，调节体系pH到5.5-8.5，放置2-10h使乳过氧化物酶完全沉淀，4℃5000-10000r/min离心20min到沉淀即为乳过氧化物酶制品；

(2)超滤：

将步骤(1)中得到的沉淀使用适量去离子水复溶用超滤膜进行超滤分离，以除去杂蛋白，收集截留溶液；

(3)脱盐处理：

将步骤(2)收集的截留溶液装入透析袋内进行脱盐；

(4)干燥：

将步骤(3)脱盐溶液冷冻干燥即制得乳过氧化物酶粗制品。

2.根据权利要求1所述的采用超滤法辅助硫酸铵盐析提取乳过氧化物酶的方法，其特征在于：所述步骤(1)中使用硫酸铵饱和度为65％。

3.根据权利要求1所述的采用超滤法辅助硫酸铵盐析提取乳过氧化物酶的方法，其特征在于：所述步骤(1)中使用硫酸铵分级沉淀盐析，具体为使用先用饱和度25-35％的硫酸铵盐析，离心，去除沉淀，上清液中继续加硫酸铵至终饱和度为55-70％。

4.如权利要求3所述的采用超滤法辅助硫酸铵盐析提取乳过氧化物酶的方法，其特征在于：所述步骤(1)中使用先用饱和度30％的硫酸铵盐析，离心，去除沉淀，上清液中继续加硫酸铵至终饱和度为65％。

5.如权利要求1所述的采用超滤法辅助硫酸铵盐析提取乳过氧化物酶的方法，其特征在于：所述步骤(1)中离心转速使用7000r/min。

6.如权利要求1所述的采用超滤法辅助硫酸铵盐析提取乳过氧化物酶的方法，其特征在于：所述步骤(1)中硫酸铵盐析时间为8h。

7.如权利要求1所述的采用超滤法辅助硫酸铵盐析提取乳过氧化物酶的方法，其特征在于：所述步骤(1)盐析体系pH为6.5。

8.如权利要求1所述的采用超滤法辅助硫酸铵盐析提取乳过氧化物酶的方法，其特征在于：所述步骤(2)中使用分子量30-50kDa的超滤膜进行超滤分离，以除去部分分子量小于30-50kDa的杂蛋白，收集截留溶液，进而达到浓缩纯化乳过氧化物酶的目的。

9.如权利要求8所述的采用超滤法辅助硫酸铵盐析提取乳过氧化物酶的方法，其特征在于：所述步骤(2)中超滤所使用的超滤膜的分子量为30kDa。

10.如权利要求1所述的采用超滤法辅助硫酸铵盐析提取乳过氧化物酶的方法，其特征在于：所述步骤(3)中将步骤(2)收集的截留溶液装入分子量2-14kDa透析袋内进行脱盐，每隔1-2h更换一次去离子水，透析3-4h即可。