[发明专利]一种对GT1-7细胞进行基因编辑的方法

说明书

技术领域

本发明属于CRISPR-Cas9领域，特别涉及一种对GT1-7细胞进行基因编辑的方法。

背景技术

CRISPR序列的发现可以追溯到1987年，Nakata和他的同事在研究E.coli iap基因时发现，在该基因的下游存在着一系列长度为29nt的重复序列，这些29nt的重复元件被32nt的非重复序列所间隔开。在以后的十年间，随着大量微生物的基因被测序，Mojica和他的同事发现这种被间隔的重复序列广泛存在于细菌和古细菌中[Ishino Y,Shinagawa H,Makino K,et al.Nucleotide sequence of the iap gene,responsible for alkaline phosphatase isozyme conversion in Escherichia coli,and identification of the gene product[J].Journal of bacteriology,1987,169(12):5429-5433]、[Mojica F J M,C,Soria E,et al.Biological significance of a family of regularly spaced repeats in the genomes of Archaea,Bacteria and mitochondria[J].Molecular microbiology,2000,36(1):244-246]。

2002年，Jansen和Mojica首次用CRISPR这一新的名词来命名这些规则被间隔的重复序列。与此同时，Jansen等在CRISPR序列的上游发现了CRISPR相关联的保守基因家族-Cas[Jansen R,Embden J,Gaastra W,et al.Identification of genes that are associated with DNA repeats in prokaryotes[J].Molecular microbiology,2002,43(6):1565-1575]。2007年，Horvath和他的同事证明了CRIPSR系统中的间隔序列作为靶向序列结合目标DNA而Cas酶介导DNA的剪切[Barrangou R,Fremaux C,Deveau H,et al.CRISPR provides acquired resistance against viruses in prokaryotes[J].Science,2007,315(5819):1709-1712]。

根据CRISPR序列的上游Cas基因家族成员的不同，可以将CRISPR系统大致分成三类(typeI-III),其中typeII CRISPR系统的Cas基因家族成员最少,用来作为基因编辑工具最为简便。2011到2013年。Sikney和Cong等利用typeII CRISPR-Cas9系统在体外、细菌体内和哺乳动物体内完成了多基因编辑操作[Sapranauskas R,Gasiunas G,Fremaux C,et al.The Streptococcus thermophilus CRISPR/Cas system provides immunity in Escherichia coli[J].Nucleic acids research,2011]、[Nucleic acids research,2011；Cong L,Ran F A,Cox D,et al.Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems[J].Science,2013,339(6121):819-823]。