[发明专利]miR‑2400显著促进牛骨骼肌卫星细胞增殖的生物功能

权利要求书

1.miR-2400用于促进牛骨骼肌卫星细胞的增殖，其特征在于：通过对牛骨骼肌卫星细胞进行体外分离培养，采用含2％马血清的分化培养基诱导牛骨骼肌卫星细胞分化，在诱导分化3天后，荧光显微镜下观察到MHC和Desmin在牛骨骼肌卫星细胞中的表达情况；牛骨骼肌卫星细胞分化后，MHC和Desmin在细胞具有阳性表达信号，从而证明本研究分离培养的为牛骨骼肌卫星细胞，且具有分化为肌管的能力；在牛的骨骼肌卫星细胞分化过程中，采用茎环荧光定量RT-PCR检测miR-2400的表达量，采用EdU、PCNA免疫荧光、CCK-8以及CCND2和CDK6表达量的荧光定量RT-PCR检测miR-2400对骨骼肌卫星细胞增殖的影响；在牛骨骼肌卫星细胞分化过程中，随着分化天数和分化程度的增加，miR-2400的表达量明显下降；EdU结果为miR-2400过表达后，牛骨骼肌卫星细胞的增殖率明显提高，转miR-2400抑制剂后，牛骨骼肌卫星细胞的增殖率明显降低；PCNA免疫荧光结果为miR-2400过表达后，牛骨骼肌卫星细胞的增殖率明显提高，转miR-2400抑制剂后，牛骨骼肌卫星细胞的增殖率明显降低；CCK-8检测结果为miR-2400过表达后，牛骨骼肌卫星细胞的增殖率明显提高，转miR-2400抑制剂后，牛骨骼肌卫星细胞的增殖率明显降低；CCND2和CDK6表达量的荧光定量RT-PCR结果为miR-2400过表达后，与增殖相关的基因CCND2和CDK6表达量明显上升，转miR-2400抑制剂后与增殖相关的基因CCND2和CDK6表达量明显下降；以上所有结果均表明miR-2400在调节牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化过程中具有一定的作用，能够显著促进牛骨骼肌卫星细胞增殖。