[发明专利]一种流加混合氨基酸母液提高杆菌肽效价的方法

说明书

一种流加混合氨基酸母液提高杆菌肽效价的方法，其特征在于，在发酵培养的过程中，流加补入混合氨基酸母液，所述混合氨基酸母液的成分包含L‑赖氨酸、L‑异亮氨酸、D‑谷氨酸。本发明提供的方法提高了发酵水平，达到了国内外的杆菌肽发酵的最高水平，并且所使用的混合氨基酸母液成分常见易得，价格低廉，控制简便，可以运用于大规模生产，降低了生产能耗和生产成本。

技术领域

本发明属于微生物发酵的技术领域，具体涉及一种流加混合氨基酸母液提高杆菌肽效价的方法。

背景技术

杆菌肽属多肽类抗生素，其结构是由12个氨基酸组成含有噻唑环的多肽复合体，它许多异构物，分别为杆菌肽A、B₁、B₂、B₃、D_l、D₂、D₃和E。其中A组分分子式为C₆₆H₁₀₃N₁₇O₁₆S₅，在所有的异构体中，其活性最高，含量也最为丰富。

杆菌肽是目前国内外广泛用于饲料中的一种新型的理想广谱抗菌素，它能够有效抑制G⁺和G^—细菌，如金黄色葡萄球菌、链球菌等。作用机理是由于它是类脂质焦磷酸的特异性抑制剂，能抑制细胞壁所合成的脱磷化过程，影响磷脂载体的转运及向细胞壁支架输送粘肽，从而抑制细胞壁的合成；另一方面是与敏感菌的细胞膜结合，损伤细胞膜，使细胞膜的通透性增加，导致细胞质外流；其次是干扰敏感菌细胞内原浆蛋白的合成。具有抗菌谱广、排泄快、畜禽吸收量少、安全性评估良好、不产生耐药性等很多优良特性，是饲料添加剂中传统抗生素的有效替代品，已被应用于生物表面活性剂、饲料添加剂、食品防腐剂和作为生物学的研究工具等。

目前杆菌肽的工业生产主要通过微生物发酵法制得，地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)是目前广泛应用的工业生产菌种。杆菌肽的发酵生产过程研究国外报道较多，国内相关报道不多，且发酵水平不高。我国的杆菌肽发酵生产始于20世纪60年代，随着我国畜牧养殖业的兴起，杆菌肽于上个世纪90年代开始大量生产，以地衣芽孢杆菌为菌种，以玉米淀粉、豆粕粉为主要碳、氮源，培养温度为37℃，经30-40h耗氧发酵培养生物合成杆菌肽，但发酵水平不高，生产能耗和生产成本高。目前的研究也主要集中在菌种的选育和发酵条件的优化方面，但是未取得突破行的进展，与国外报道的1200u/ml的水平相差还是很大，我国杆菌肽发酵工业的生产水平亟待提高。

发明专利申请号为201210352122.8的专利“一种利用氧载体提高发酵液中杆菌肽效价的方法”，提出了在微生物发酵培养基中添加氧载体，是通过增加发酵液中氧气的容量，提高氧气传递速率，提高杆菌肽的产量，但是其需要用特定的地衣芽孢杆菌来进行发酵，而且其对杆菌肽的产量并没有大幅度的提高，杆菌肽的产量依然很小，不能满足杆菌肽的效价需求。发明专利申请号为201410163014.9的专利“一种连续流加补料分批发酵提高杆菌肽效价”，提出在发酵的过程中补入“豆粕粉、玉米粉、玉米淀粉、玉米浆、葡萄糖”此专利中补入的补料提供的是生长代谢所需的营养物质，是在生长期补入，该时期加入的补料使杆菌肽效价有所提高，但是依然不能达到国外的效价水平，杆菌肽发酵工业的生产水平依然亟待提高。

发明内容

本发明提供了一种在发酵过程中流加混合氨基酸做为前体物质来提高杆菌肽效价的方法，其目的在于克服现有技术的不足，提高发酵单位，缩小与国外技术水平的差距，降低生产能耗和生产成本，本发明为实现其目的采用的技术方案是：

一种流加混合氨基酸母液提高杆菌肽效价的方法，在发酵培养的过程中，流加补入混合氨基酸母液，所述混合氨基酸母液的成分包含L-赖氨酸、L-异亮氨酸、D-谷氨酸、水。

当发酵时间为10-16h时，开始流加补入混合氨基酸母液，直至发酵终止。