[发明专利]一种黄曲霉毒素B1的免标记可视化检测方法及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，涉及一种黄曲霉毒素B1的免标记可视化检测及检测试剂盒。

背景技术

黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1, AFB1）是真菌的次级代谢产物，属于真菌毒素，主要由黄曲霉、寄生曲霉以及特曲霉等产生，在发霉的粮油制品中普遍存在，严重危害食品安全和人体健康。AFB1具有强烈的毒性和致癌性，是目前化学致癌物中最强的一种致癌诱变剂，其毒性比氰化钾强10倍。AFB1被国际肿瘤研究机构列为I类致癌物质。因此对AFB1的快速检测具有重要意义。传统的AFB1的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、质谱法等，这些方法需要繁琐的样品前处理和昂贵的仪器，检测成本高、费时耗力，需要经验丰富的操作人员难以实现大批量样本的现场快速分析。另一种方法是以抗体来检测AFB1，但是抗体的制备过程繁琐，保存麻烦，而且要涉及多次洗涤与分离过程，因而限制了它们的广泛应用。

发明内容

为了解决现有技术中所存在的不足，本发明旨在以AFB1的核酸适体为分子识别元件，结合胶体金技术，建立一种黄曲霉毒素B1的免标记可视化检测方法及检测试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

一种黄曲霉毒素B1的免标记可视化检测试剂盒，其包括：

（1）黄曲霉毒素B1的核酸适体；

（2）胶体金；

（3）NaCl。

作为优选的，所述黄曲霉毒素B1的核酸适体的核苷酸序列如下所示：

5'-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3'。

作为优选的，所示试剂盒中还包括pH 7.4的Tris-HCl缓冲液。

一种黄曲霉毒素B1的免标记可视化检测方法，包括如下步骤：

（1）将胶体金与黄曲霉毒素B1的核酸适体分散于缓冲液中，混匀；

（2）往步骤（1）混合液中加入待检样品，混匀；

（3）往步骤（2）混合溶液中加入NaCl，混匀，观察颜色变化，溶液保持红色，表明待检样品中不含黄曲霉毒素B1，溶液变成蓝紫色，表明待检样品中含有黄曲霉毒素B1。

作为优选的，所述黄曲霉毒素B1的核酸适体的核苷酸序列如下所示：

5'-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA -3'。

作为优选的，所述缓冲液为pH 7.4的Tris-HCl缓冲液。

一种黄曲霉毒素B1的核酸适体，其为如下核苷酸序列所示DNA分子或者是与其互补的核苷酸序列所示的DNA分子：

5'-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3'。

本发明的有益效果是：

本发明以AFB1的核酸适体为分子识别元件，通过胶体金的颜色变化来检测AFB1，检测结果直接肉眼可见，无需任何检测仪器；操作简单，无需抗体，无需任何标记修饰，无需任何洗涤分离过程，适于现场快速检测；成本低廉，经济便宜，响应迅速，适于广泛推广。

附图说明

图1为本发明所述的检测方法的原理图；

图2为对不同浓度的AFB1检测的结果图；

图3为特异性实验结果图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。

实施例1

一种黄曲霉毒素B1的免标记可视化检测试剂盒包括以下成分：

（1）AFB1的核酸适体，序列如下：

5'-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3'（SEQ ID NO.1）；

（2）胶体金溶液；

（3）50 mM Tris-HCl冲液（pH 7.4）；

（4）10 mM NaCl溶液。

一种黄曲霉毒素B1的免标记可视化检测方法，包括如下步骤：

（1）AFB1核酸适体用50 mM Tris-HCl冲液（pH 7.4）溶解，浓度为20 nM；

（2）加入粒径大小约为15 nM的胶体金溶液，充分混匀，室温放置15分钟；

（3）加入待检样品，充分混匀，室温反应30分钟；