[发明专利]一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法

权利要求书

1.一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）取铬污染土壤样品10 g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；

（2） 取步骤（1）培养液1 ml转移进100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬20 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；

（3） 取步骤（2）培养液 1 ml转移至100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬30 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm，以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量，逐步增加六价铬的含量，直至六价铬浓度达到50 mg/L，培养24 h后得到驯化菌液；

（4） 取驯化菌液1 ml转移至9 ml无菌生理盐水中，稀释10倍，菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10^-7；

（5）从10^-6、10^-7 g两个稀释组中分别取0.1 ml涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，培养箱中30℃培养24 h；

（6）从上述步骤中分别挑取单菌落，平板划线纯化，得到一株芽孢杆菌Bacillus 和一株地霉菌Geotrichum，斜面保存备用；

（7）将芽孢杆菌Bacillus 和地霉菌Geotrichum单独培养，得到单一菌液，再将菌液按体积比1:1接种于同一污染水体中混合培养，用于处理六价铬污染，使混合菌能够处理酸性和碱性废水，扩大菌剂对进水酸碱度适应范围，酸性进水时，芽孢杆菌优先大量繁殖，代谢产物积累，溶液pH降低，为地霉菌生长创造条件，地霉菌开始大量繁殖，生物量的增加使六价铬含量及有机物含量快速降低，水质得到净化，而碱性进水时适宜地霉菌生长，地霉菌短时间内大量增殖还原、吸附六价铬，消耗有机质，水质得到净化。

2.  根据权利要求1所述一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：所述芽孢杆菌Bacillus 和地霉菌Geotrichum单独培养包括如下步骤：挑取制备好的芽孢杆菌Bacillus 和地霉菌Geotrichum分别在含有40mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养，各取1 ml菌液同时加入pH为2、4、6、7、8、10的150 ml无机盐培养基中，其中六价铬含量为40mg/L，摇床转速为120 rpm， 温度为30℃培养，每隔一定的时间取样5 ml，在9280×g离心力作用下离心15 min，取上清液，稀释10倍后按标准法HJ687-2014测定并计算六价铬残留量。

3.  根据权利要求1所述一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：步骤（1）所述牛肉膏蛋白胨液态培养基的成分为：牛肉膏3 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠5 g/L、水1 L。

4.根据权利要求1所述一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：步骤（2）和（3）所述无机盐液态培养基成分为0.5g/L  K₂HPO₄，1g/L  KH₂PO₄， 0.5g/L  MgSO₄，0.01g/L  CaCl₂，1g/L  NH₄Cl，0.01g/L  FeSO₄， 1.0g/L  NaCl，0.003g/L  MnSO₄，5g/L葡萄糖。

5.根据权利要求1所述一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：步骤（5）所述牛肉膏蛋白胨固态培养基为牛肉膏蛋白胨液态培养基中加入15~25 g琼脂。

6.根据权利要求1所述一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：步骤（4）所述依次梯度即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中。