[发明专利]糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用离子交换及色谱法来分析材料成分的检测方法，具体涉及一种糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法。

背景技术

人体血液中糖化血红蛋白的浓度是糖尿病诊断的重要临床指标。正常血红蛋白（Hb）被糖化后会形成多种亚组分，但最主要的亚组分为HbA_1c，其形成后结构稳定，有90～120天的生命周期。通过检测该指标，可反映糖尿病人三个月的平均血糖水平。因此，临床上一般以该指标作为糖尿病人的筛查、诊断、治疗的重要依据。

目前对糖化血红蛋白的测定主要采用离子交换层析法，其原理基于血红蛋白糖化后分子表面的阳离子的丢失。当含有糖化血红蛋白的样本经过阳离子交换层析柱时，糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白均被阳离子交换树脂所吸附。临床上将离子交换高效液相色谱分析法（HPLC）作为糖化血红蛋白HbA_1c国际公认的金标准分析方法，能分离出多种糖化血红蛋白亚组分。如EP2703808A1所示，只采用两种离子浓度的洗脱液，即一种高离子浓度洗脱液和一种低离子浓度洗脱液，通过机内的一种配比混合装置来配比生成多种不同离子浓度的洗脱液，以对样本进行洗脱。理论上讲，在一定压力条件下，配比出的离子浓度种类越多，能洗脱分离的血红蛋白亚组分种类也越多（如HbF）。高压液相层析法由于采用能耐受近180个大气压的离子交换层析柱，一般可以层析出多达十几种糖化血红蛋白的亚组分。其由于采用机内配比不同浓度洗脱液，必然带来仪器的复杂程度增高、故障率相对增加，而且洗脱液的交叉污染严重，仪器的制造、维修、使用的成本也高。

在临床实践中，真正具有指导意义的糖化血红蛋白指标只有HbA_1c。申请人此前在CN102226788 A中提出过一种利用四种特定浓度洗脱液对HbA_1c进行洗脱的方法，本申请就是对上述申请的进一步修改和完善，通过对洗脱液组分的优化以及洗脱方法的改进来进一步提高梯度洗脱法的性价比。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明提供的糖化血红蛋白分析仪三梯度洗脱分析法，采用阳离子交换层析的方法分析HbA_1c在临床样本中所占比例，利用三种特定离子浓度的洗脱液依次对吸附了血红蛋白的阳离子交换树脂进行洗脱，洗脱顺序如下：

a)糖化血红蛋白中的两种亚组分HbA_1a+b(即HbA_1a和HbA_1b)；

b)糖化血红蛋白HbA_1c；

c)非糖化血红蛋白HbA₀；

洗脱过程中对洗脱后的样本做实时、持续的比色测量，以时间为横轴，浓度为纵轴，得到实时的三梯度浓度和洗脱色谱合成图，最后将HbA_1c波形面积在色谱合成图波形总面积中所占比例作为HbA_1c在血红蛋白中的占比；

所述洗脱液包括：

A洗脱液：用于洗脱糖化血红蛋白HbA_1a+b亚组分和阳离子交换树脂的清洗、平衡及再生；

B洗脱液: 用于洗脱糖化血红蛋白HbA_1c亚组分；

C洗脱液: 用于洗脱非糖化血红蛋白HbA₀。

具体地，上述三种洗脱液中各组分的质量百分比如下：

本发明依据临床检测要求的重点，配比从低到高逐步梯度递增的三种不同离子浓度的洗脱液，即专门用于洗脱糖化血红蛋白亚组分（HbA1a+b）和用于样本洗脱后的阳离子交换树脂清洗、再平衡的A洗脱液、专门用于洗脱糖化血红蛋白（HbA1c）亚组分的B洗脱液和专门用于洗脱非糖化血红蛋白的C洗脱液。采用这三种专用洗脱液即可实现清洗、平衡、洗脱以及阳离子交换树脂的再生等所需的全部功能。采用该方法的仪器也只需采用普通的电磁阀和简单的流路系统，在常压的条件下就能实现只有高效液相层析法在高压条件下才能实现的糖化血红蛋白HbA1c的分离精度，也避免了为配比多种离子浓度洗脱液而必须采用的结构复杂的配比混合装置，消除了不同浓度洗脱液之间的交叉污染影响，可使洗脱液的离子浓度更精确可靠，糖化血红蛋白HbA1c亚组分的分离精度更高,并且完全满足临床诊断的需要。

有益效果：