[发明专利]一种杜鹃花化学消毒组培方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种杜鹃花化学消毒组培方法，属生物技术领域。

背景技术

杜鹃花属(RhododendronLinn.)植物是世界著名的观赏植物，是我国十大名花之一，也是世界著名观赏花卉.其艳丽多彩的花色和得体的盆花造型一直占据着我国春节花卉热销品种之一。杜鹃花通常采用种子、扦插、压条和嫁接方法繁殖,但受种类或品种、季节、母株材料等因素限制，难于进行大量的商业化生产。自1975年Anderon首次成功地建立了山杜鹃(Rhododendron xx)的离体培养体系，组织培养已成为杜鹃花繁殖的重要手段，广泛应用于种质资源保护、遗传育种和无性系苗木的商业化生产中。对于特定的杜鹃花种类、品种，其离体繁殖成功的关键在于基本培养基的选择，在外植体的诱导和增殖培养中对所添加激素种类及配比的优化，以及对驯化移栽中环境因子的调控。但是，由于杜鹃花种类和品种间的差别，在组织培养过程中继代增殖培养、诱导生根、组培苗的驯化移栽体系的建立，仍是组织培养中急需解决的问题，特别是丛生芽和不定芽分化率低的问题,是组培快繁的瓶颈。

杜鹃组织培养，一方面可以扩大其繁殖系数，从而实现规模化繁殖；另一方面，可以在保存其原有的优良性状的基础上，实现杜鹃的种质资源保存和转基因研究等。杜鹃组织培养的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备、供电成本、耗材和人工成本。常规的杜鹃组织培养方法要求外植体接种在高温高压灭菌后的无菌培养基中才能正常生长，耗能大，人工操作成本高。如果能通过化学消毒的方法来改造培养基，使培养基在不需要进行高温高压灭菌，就能够获得杜鹃的正常生长。这样，一方面可以降低杜鹃组织培养对设施设备的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，缩减了投资成本，电能消耗也将大幅度降低；另一方面，采用这种培养基开展杜鹃组织培养，组培环节大为简化，人工操作的速度大幅提高，从而降低了人工成本。此外，由于改造后的培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制组织培养过程中的污染问题，又不会对杜鹃生长产生毒害或抑制，即不影响杜鹃的正常生长，从根本上简化了杜鹃组织培养。

发明内容

本发明的目的是提供一种杜鹃花化学消毒组培方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的。

本发明的一种杜鹃花化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：

1.培养容器消毒：将培养瓶瓶盖及接种用的不锈钢盘在100mg/L次氯酸钠+2mg/L青霉素+100mg/L丙酸钙的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；

2.培养基配制：诱导培养基为ER+6～15mg/L ZT+5～15mg/L IAA+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为：ER+1～3mg/L ZT+0.5～1.0mg/L IAA+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2ER+0.5～1.5mg/LNAA+0.1～0.5IBA mg/L+40～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+50～100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述ER培养基为1965年，Eriksson公开的ER培养基；所述ZT为玉米素；所述NAA为〆-萘乙酸；所述IAA为吲哚乙酸；所述IBA为吲哚丁酸；配制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容、然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；

3.诱导培养：取健壮的杜鹃顶芽或花蕾，先自来水冲洗表面灰尘，剥去外苞片，用体积比为75％酒精中浸2～3s，再用重量比为0.1％HgCl₂消毒6～10min，无菌水冲洗3～5次；在超净工作台上，剥去2～3层的苞片，切除基部褐化部分，接种到诱导培养基上，40d后形成若干小芽；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；

4.增殖培养：将诱导培养的小芽转入增殖培养基中,30d后逐步诱导出丛生芽并发育成不具根的丛生芽苗；将丛生芽苗切成带芽的茎段，转接到新的增殖培养基中，每30d转接一次；培养室温度为25～28℃，光照12h，光照强度为1200～1500lx；