[发明专利]高纯度低分子量肝素钠的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药原料制备领域，具体涉及一种高纯度低分子量肝素钠的制备方法。

背景技术

肝素钠是粘多糖硫酸酯类抗凝血药，属粘多糖类物质。其药物功能主要体现在：治疗各种疾病并发的播散性血管内早期凝血；预防动、静脉血栓和肺栓塞；治疗动、静脉血栓和肺栓塞，缺血性脑卒中，不稳定型心绞痛，急性心肌梗塞；人工心肺、腹膜透析或血液透析时作为抗凝血药物；作为溶血栓疗法的维持治疗，用于输血时预防血液凝固及血库保存鲜血等体外抗凝剂。

纯化的肝素钠过程主要是对粗品肝素钠进行除杂和脱色，现有技术中，肝素钠的纯化主要有两种：①在不同pH条件下采用高锰酸钾和过氧化氢两步氧化法，②过氧化氢分次加入的二次氧化法，经这两种方法处理后再以有机溶剂进行分级沉淀获得纯化的肝素钠。但第一种方法的缺点是产品的活性损失大、色泽差，产生的二氧化锰较难滤除，且二氧化锰对肝素钠有部分吸附作用，同时得到肝素外用级或类肝素等副产品，使产品回收率较低；第二种方法所得产品色泽较好，目前应用比较广泛，但可能是二次氧化对肝素钠结构造成破坏，难以得到较高纯度的低分子量肝素钠。

低分子肝素是从普通肝素通过降解得到的小分子肝素制品，具有生物利用率高、血浆半衰期长等优点，特别是其引起的出血副作用大幅降低。目前高纯度低分子量肝素钠的制备方法生产周期长、得率低，工艺复杂而且制得的产品质量不稳定。

发明内容

针对现有技术不足，本发明提供了一种高纯度的低分子量肝素钠的制备方法。

本发明解决上述技术问题采用的技术方案为：高纯度低分子量肝素钠的制备方法，包括以下步骤：

①粗品低分子量肝素钠的制备

a.将粗品肝素钠溶于生理盐水中，充分搅拌溶解后，向溶液中边搅拌边滴加碱液至沉淀产生，静置后滤去不溶物得肝素钠溶液；

b.调节a步骤所得的肝素钠溶液pH为5～6，并将肝素钠溶液降温至1～8℃，分3次加入总重量为粗品肝素钠1.2％的亚硝酸钠，每次加入1/3的亚硝酸钠，并充分搅拌2～3h后再行加入，最终得粗品低分子量肝素钠溶液；

②粗品低分子量肝素钠的纯化

c.将b步骤所得粗品低分子量肝素钠溶液用碱液调节pH为8～9，并加入为溶液质量4～5％的氯化钠，充分搅拌后采用阴离子交换柱吸附；

d.采用浓度为3～5％的氯化钠溶液洗涤，并采用浓度为15～25％的氯化钠溶液洗脱，将洗脱液经超滤膜过滤，所得滤液加入2倍的乙醇并充分搅拌，用于沉淀肝素钠，得沉淀物；

e.将沉淀物脱盐及脱水后，于30～50℃下抽真空干燥得纯化肝素钠；

f.将所得纯化肝素钠采用凝胶过滤，经杀菌消毒处理后得高纯度低分子量肝素钠。

进一步地，所述阴离子交换柱为弱碱性离子交换柱D315。

进一步地，所述碱液为NaOH溶液。

进一步地，所述超滤膜为5000D的超滤膜。

按照本制备方法制得的低分子肝素钠抗FXa效价在120～180IU/mg，平均分子量在2200～3000Da，抗FIIa效价在1～8IU/mg。

按照本制备方法制得的低分子肝素钠抗FXa效价在140～150IU/mg，平均分子量在2400～2600Da，抗FIIa效价在1.5～2IU/mg。

本发明所具备的优点：

1、本发明的原料‐粗品肝素钠来源丰富，得率可达85％以上，所得产品纯度高、质量稳定，成本低，无毒副作用，可进一步制备成注射剂、胶囊剂等。

2、工艺简单，无废液排放，工艺条件环保。

3、本发明制得的产品抗FXa效价在120～180IU/mg，平均分子量在2200～3000Da，抗FIIa效价在1～8IU/mg，综合质量较高。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的阐述。

实施例1：高纯度低分子量肝素钠的制备方法，包括以下步骤：

①粗品低分子量肝素钠的制备

a.将粗品肝素钠溶于生理盐水中，充分搅拌溶解后，向溶液中边搅拌边滴加碱液至沉淀产生，静置后滤去不溶物得肝素钠溶液；

b.调节a步骤所得的肝素钠溶液pH为5～6，并将肝素钠溶液降温至4℃，分3次加入总重量为粗品肝素钠1.2％的亚硝酸钠，每次加入1/3的亚硝酸钠，每次加入时要缓慢加入并充分搅拌2h后再次加入，最终得粗品低分子量肝素钠溶液；

②粗品低分子量肝素钠的纯化