[发明专利]一种基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及属于手性识别、比色分析和环境检测技术领域，尤其涉及一种检测S-布洛芬和R-布洛芬的适配体比色检测方法。

背景技术

手性对映体的存在是自然界的一种普遍现象，作为生命活动重要基础的生物大分子，如蛋白质、多糖、核酸和酶等，几乎全是手性的，这些小分子在体内往往具有重要生理功能。手性对映体在吸收、分布、代谢与排泄过程中，通过与体内大分子的不同立体结合，产生不同的药理作用和反应。在临床治疗方面，服用对映体纯的手性药物不仅可以排除由于无效(不良)对映体所引起的毒副作用，还能减少药剂量和人体对无效对映体的代谢负担，对药物动力学及剂量有更好的控制，提高药物的专一性具有十分广阔的市场前景和巨大的经济价值。因此，手性对映体的分离、分析，对研究生命科学、药物化学以及人类健康都具有十分重要的意义。目前世界上使用的药物总数约为1900种手性药物占50％以上，在临床常用的200种药物中，手性药物多达114种。

近年来，各种手性识别方法得到了发展。最简单的是旋光度法，但是同一种光学活性化合物的旋光方向会因测定的条件的改变而发生变化，与立体结构之间缺少任何容易分辨的联系，通过测定旋光度来识别手性化合物就受到了局限。高效液相色谱法、毛细管电泳法等是将分离手段结合光度检测来实现的，但是往往需要的手性色谱柱价格昂贵、较大的试剂损耗且对分离的条件要求很高，分析时间长不利于快速识别。而光谱分析法和电化学传感器，灵敏度低和识别过程较为复杂。因此有待发展一种简单、快速、灵敏的手性识别方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于核酸适体修饰纳米金的手性化合物检测方法，以核酸适体修饰的纳米金为手性选择试剂，利用适体高选择性和高亲和性的特点，使用一段可特异性识别S-布洛芬的单链核酸适配体探针(以及可特异性识别R-布洛芬的单链核酸适配体探针)分别与金纳米粒子结合形成金纳米粒子-S-适配体复合探针和金纳米粒子-R-适配体复合探针，在有对应的S-布洛芬存在的情况下，S-适配体复合探针与S-布洛芬特异性结合，从而引起金纳米粒子表面核酸适配体构象变化，使得金纳米粒子对盐的耐受能力降低从而出现金纳米粒子聚沉出现蓝色的现象；在有对应的R-布洛芬存在的情况下，S-适配体复合探针不会与R-布洛芬特异性结合，纳米金不会在高盐浓度下聚沉出现蓝色现象。同理，在有对应的R-布洛芬存在的情况下，R-适配体复合探针与R-布洛芬特异性结合，引起核酸适配体构象变化，出现金纳米粒子聚沉呈蓝色的现象。相反在有S-布洛芬存在下R-适配体复合探针复合的纳米金粒子不会出现聚沉呈蓝色的现象。

为了达到上述目的，本发明提供了一种基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法，其特征在于，具体步骤包括：

第一步：制备金纳米颗粒溶液；

第二步：制备S-布洛芬适配体和R-布洛芬适配体中的至少一种；

第三步：以S-布洛芬适配体为S-布洛芬的识别探针，将金纳米颗粒溶液，S-布洛芬适配体溶液、氯化钠溶液和S-布洛芬标准溶液混合，定容，得到标准检测液，反应30min后，根据金纳米粒子聚沉引起其溶液变色程度的不同，通过紫外分光光度计检则检测体系在650nm和520nm处的吸光值A650和A520，绘制标准曲线；利用该标准曲线检测待测样品中的S-布洛芬浓度；或者，以R-布洛芬适配体为R-布洛芬的识别探针，将金纳米颗粒溶液，R-布洛芬适配体溶液、氯化钠溶液和R-布洛芬标准溶液混合，定容，得到标准检测液，反应30min后，根据金纳米粒子聚沉引起其溶液变色程度的不同，通过紫外分光光度计检则检测体系在650nm和520nm处的吸光值A650和A520，绘制标准曲线，利用该标准曲线检测待测样品中的R-布洛芬浓度。

优选地，所述的S-布洛芬适配体为长度为40bp的单链DNA探针，5’端修饰了巯基(-SH)；所述的R-布洛芬适配体为长度为40bp的单链DNA探针，5’端修饰了巯基(-SH)。

优选地，所述的S-布洛芬适配体的序列为：

5’-SHACAGCGTGGGCGGTGTCGGATTTTCGTATGGATGGGGATG-3’。

优选地，所述的R-布洛芬适配体的序列为：

5’-SH GCGAACGACTTCATAAAATGCTATAAGGTTGCCCTCTGTC-3’。