[发明专利]一种蛹虫草生产用的专用母种的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种蛹虫草生产用的专用母种的制备方法，属于食用菌生产技术领域。

背景技术：

蛹虫草Cordyceps militaris L.Link，又名北冬虫夏草，北虫草。蛹虫草是为数不多的几种可以在人工培养基、家蚕或柞蚕蛹上进行人工批量培养的药用真菌。蛹虫草的菌丝体及子实体中含有虫草素、虫草酸、虫草多糖、SOD、腺苷、鸟苷、尿苷等多种药用成分，同时富含多种人体必需氨基酸和微量元素。蛹虫草工业化获得菌丝体及子实体需要大量制备液体菌种。蛹虫草的液体菌种制备过程包括：斜面母种制备→一级摇瓶→二级摇瓶(扩大培养)→液体菌种(发酵罐)。菌种需逐级扩大培养，这种生产方法存在生产周期长、易污染、生产成本高、菌种容易退化等缺点。这些问题不利于蛹虫草菌丝体和子实体的工业化生产。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种解决现有技术问题的一种蛹虫草生产用的专用母种的制备方法。

实现本发明目的的技术方案有以下步骤：

专用母种制备方法：

1、一级摇瓶菌种

①培养基配方(g/L)：马铃薯200g，磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、柠檬酸铵1g、葡萄糖30g、蛋白胨3g、维生素B1 50mg。

②生产工艺：

马铃薯浸汁制备：优质无菌的马铃薯削皮，用水清洗干净，称重200g马铃薯，切成3-4mm片，放入锅中，加入清水1L煮到酥而不烂，用纱布过滤残渣，取出过滤液倒入容器中冷却后待用。

配料：称取磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、柠檬酸铵1g、葡萄糖30g、蛋白胨3g、维生素B1 50mg，加入马铃薯煮出液，搅拌均匀，定容至1000mL。

分装：将配置好的培养基分装到500mL锥形瓶中，每瓶200mL。三角瓶中放入5mm玻璃株20-30粒，8层纱布和双层报纸封口。

灭菌：将培养基放入高压灭菌锅，115℃，高压灭菌20分钟，冷却后取出备用。

接种：接入蛹虫草一级斜面母种，每瓶接种0.5-1cm²菌种块，5-6块。

培养：将接好种的菌瓶，在23-25℃静置培养2天，再放在回转式摇床中，23-25℃，120-160转/分震荡培养3-5天。

2、专用母种生产：按重量百分比计

培养基配方：麸皮78％，小米20％，另外加入营养液，料液比1∶1.3，pH 6.5。

营养液配方：(蔗糖20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁5g，水1000mL)。

生产工艺：

原料处理：将麸皮和小米分别过孔径为1mm和2mm筛，选用两筛之间的颗粒做为原料。

配料：按营养液配方称取配料，将其溶解在水中，配制营养液。然后按培养基配方称取上述过筛后的麸皮和小米，按料液比＝1∶1.3加入营养液，料液比为重量比，与小米、麸皮等充分混匀。

装瓶：将上述培养料装入，500mL茄瓶，摊平，每瓶装干料50-70g，装料厚度1-2cm，塞好棉塞，扎好牛皮纸，121-126℃灭菌45分钟，待温度降至30℃以下备用。

接种：用灭菌好的移液管把培养好的一级摇瓶菌种接种到上述茄瓶中的固态培养基中。

培养：在23-25℃条件下避光培养，菌丝长满后即可。

保藏：将培养好的专用母种，加入30-50mL 30％的无菌甘油，混匀，于4℃冰箱保藏。

本发明的积极效果有：

(1)省去菌种逐级扩大培养过程，节约生产周期1/3以上。

(2)节省了种子逐级扩大设备成本，降低生产成本1/3以上。

(3)接种简便，减少污染。

(4)降低了菌株退化风险。

具体实施方式：

以下通过实施例对本发明做进一步描述：

实施例1：专用母种制备

专用母种制备方法：

1、一级摇瓶菌种

①培养基配方(g/L)：马铃薯200g，磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、柠檬酸铵1g、葡萄糖30g、蛋白胨3g、维生素B1 50mg。

②生产工艺：

马铃薯浸汁制备：优质无菌的马铃薯削皮，用水清洗干净，称重200g马铃薯，切成3-4mm片，放入锅中，加入清水1升煮到酥而不烂，用纱布过滤残渣，取出过滤液倒入容器中冷却后待用。

配料：称取磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、柠檬酸铵1g、葡萄糖30g、蛋白胨3g、维生素B1 50mg，加入马铃薯煮出液，搅拌均匀，定容至1000mL。