[发明专利]中性解吸‑电喷雾萃取电离质谱法快速检测蜂蜜中毒死蜱

说明书

技术领域

本发明属于检测技术领域，特别涉及蜂蜜中毒死蜱的检测方法。

背景技术

毒死蜱是一种广泛使用的高效广谱有机磷农药，既可以杀螨，又可做卫生除虫药，主要用于蔬菜果树、棉花等多种作物的病虫害防治，但对蜜源植物的威胁较大。毒理学研究表明，毒死蜱具有显著抑制胆碱酯酶活性的作用，对小鼠的中枢神经系统产生毒害，并具有一定的致畸作用。蜂蜜中有机磷农药残留的分析研究表明，毒死蜱在蜂蜜中的残留超标现象普遍存在。中国是世界第一养蜂大国，也是蜂产品生产和出口大国。随着人民生活水平的提高以及进出口贸易的快速发展，蜂蜜中的毒死蜱残留已经成为影响我国蜂蜜出口的首要因素，严重危害国民食品安全及经济的发展。

目前，常用的毒死蜱检测方法有酶联免疫分析法、高效液相色谱法、液质联用法、气质联用法等。这些方法一般都需要复杂的样品预处理过程，具有操作步骤繁琐、费时等缺陷，给蜂蜜中毒死蜱的检测带来许多不便。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的对蜂蜜中毒死蜱残留直接检测的方法。本发明在无需样品预处理的条件下，对蜂蜜中的毒死蜱直接进行快速检测。本发明采用毒死蜱的三级串联碎片进行定量分析，避免假阳性，提高检测的准确性。

本发明所述的检测方法是借助常规的LTQ-XL型线性离子阱质谱仪和中性解吸-电喷雾萃取电离(neutral desorption-extractive electrospray ionization mass spectrometry,ND-EESI)源进行含毒死蜱蜂蜜样品的检测。

本发明技术方案如下：

一种中性解吸-电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂蜜中毒死蜱的方法，包括如下步骤：

(1)加标蜂蜜配制：称取待测样品蜂蜜，待用；

加标蜂蜜配制：平行几份称取与待测样品蜂蜜等重的无毒死蜱蜂蜜，分别加入梯度浓度的毒死蜱溶液，搅拌均匀，成加标蜂蜜，待用；

将待测样品蜂蜜及加标蜂蜜均用保鲜膜封口65℃水浴5min；待蜂蜜冷却到室温，进行检测；

(2)中性解吸—电喷雾萃取电离质谱检测：将ND-EESI-MS设置为正离子检测模式，质谱检测扫描范围为m/z 50～400；以甲醇水溶液为中性解吸试剂；电离电压3.5kV；离子传输管温度为300℃；雾化气为氮气，压力为1.0MPa；萃取剂甲酸：甲醇：水体积比1:2:2，流速为4μL/min；

碰撞诱导解离实验时，毒死蜱母离子m/z 352宽度设置为1.2Da，碰撞能量30％，碰撞持续时间为30ms；二级m/z 324离子宽度设置为1.4Da，碰撞能量为15％，碰撞持续时间为30ms，以三级m/z 296作为定量离子；

其它参数采用LTQ-MS系统自动优化；喷雾溶剂通道与水平面夹角为30°，溶剂喷雾口与质谱口距离为0.5cm；为保证样品分子最大限度与试剂离子进行碰撞并发生反应，两喷雾通道夹角α保持60°，样品喷雾口与质谱入口距离d为0.5cm，β角如图1所示；

(3)是否含有毒死蜱的判断：如果在m/z 352的三级碎片中有m/z 296离子信号峰，说明样品中有毒死蜱；

选择m/z 352的三级特征碎片离子m/z 296进行定量分析,以加标蜂蜜中毒死蜱浓度为横坐标，以m/z 296的绝对信号强度为纵坐标绘制标准曲线，根据标准曲线得出待测样品蜂蜜中毒死蜱的浓度。

本发明的有益效果是:(1)检出限更低,对蜂蜜中毒死蜱的检出限为1.64ng/mL。(2)采用三级信号作为定量信号，避免了假阳性。(3)本发明方法采用甲酸：甲醇：水(1:2:2)喷雾进行中性解吸,解吸效率高,提高了目标信号的强度。(4)实现了蜂蜜的原位分析，无需对样品进行预处理。(5)使实现直接快速的蜂蜜污染物检测技术的应用成为可能,为蜂蜜产业的可持续发展奠定基础。

附图说明

图1为本发明方法的ND-EESI实验装置图。

图2为本发明毒死蜱(100ng/mL)的MSⁿ谱图，图中，(a)为毒死蜱甲醇溶液一级质谱图，(b)为毒死蜱甲醇溶液串联质谱图，(c)为加标蜂蜜毒死蜱一级质谱图，(d)为加标蜂蜜毒死蜱串联质谱图。