[发明专利]一种从菜芙蓉中提取总黄酮的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分离领域，具体是涉及一种从菜芙蓉中提取总黄酮的方法，特别是采用膜分离结合大孔树脂纯化菜芙蓉总黄酮的方法。

背景技术

菜芙蓉(Hibiscus manihot)为锦葵科秋葵属一年生草本植物。菜芙蓉，又名金花葵。菜芙蓉的花、叶、根、茎、种子中均含有丰富的黄酮，尤其是菜芙蓉花中生物黄酮的含量很高，比目前在黄酮生产中广泛应用的原料大豆、银杏高近百倍，高居现在已知植物的首位。黄酮类化合物具有很强的抗氧化活性，它在抗心脑缺血、缺氧，增进人体代谢中的抗氧化功能以及缓解抑郁紧张症状和增强肾功能等方面有显著效果。

有关菜芙蓉总黄酮的提取分离目前已有报道，主要为醇水萃取，大孔树脂分离纯化。该方法存在提取率较低，机溶剂用量大、处理时间长等缺点。因此研究绿色环保、简单方便的中药成分提取分离方法已成为当今生物医药的前沿课题之一。微波萃取是利用电磁场的作用使固体或半固体物质中的某些有机物成分与基体有效的分离，并能保持分析对象的原本化合物状态的一种分离方法，具有提取时间短、产率高、条件温和等优点。膜分离技术是一种使用半透膜分离方法，其分离原理是依据物质分子尺度的大小，借助膜的选择渗透作用，在外界能量或化学位差的推动作用下对混合物中多组分溶质和溶剂进行分离、分级提纯和富集，从而达到分离、提纯和浓缩的目的。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种从菜芙蓉中提取总黄酮的方法，该方法首先采用微波萃取法提取菜芙蓉中总黄酮，然后采用膜分离纯化菜芙蓉总黄酮，最后采用树脂吸附精制菜芙蓉总黄酮。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

(1)提取：将菜芙蓉根、茎、叶、种子或花烘干粉碎后，放入质量浓度为40～99％的乙醇溶液中浸泡1～3h，菜芙蓉与乙醇的料液比为1∶10～1∶50，然后采用微波提取10～60min，过滤得到菜芙蓉总黄酮提取液；

所述微波功率为100～2000W；

(2)纯化：将菜芙蓉提取液先通过截留分子量为10000～50000Da的中空纤维膜，跨膜压差为0.1～1.0MPa，收集透过液；再通过截留分子量为2000～6000Da的中空纤维超滤膜，跨膜压差为0.1～1.0MPa，收集透过液；最后通过截留分子量为100～500Da的纳滤膜浓缩，跨膜压差为1.0～5.0MPa，得到菜芙蓉总黄酮浓缩液；

所述中空纤维膜为聚砜或聚醚砜中空纤维膜，纳滤膜为聚酰亚胺或醋酸纤维纳滤膜；

(3)精制：将菜芙蓉浓缩液流经大孔吸附树脂柱进行吸附1～6h，用水对已经吸附浓缩液的大孔树脂柱进行水洗，然后用质量浓度为30～95％的乙醇溶液对水洗过的大孔吸附树脂柱进行醇洗，将醇洗后得到的洗脱液放入冷冻干燥机内进行冷冻干燥，干燥得到菜芙蓉总黄酮。

所述大孔吸附树脂为AB-8、NKA-9、HPD100、HPD400、HPD600、ADS-7、ADS-17、D101、XDA-6中的一种或几种混合物。

本发明所述的一种菜芙蓉总黄酮的提取方法，通过该方法获得的菜芙蓉总黄酮含量测定方法：黄酮类物质在氧化剂亚硝酸盐存在下，与硝酸铝生成黄色的黄酮铝络合物，在碱性环境下显红色，因此采用NaNO₂-Al(NO₃)₃显色法，加入铝离子试剂使黄酮类化合物与铝盐形成络合物在可见光内获得稳定的吸收峰，利用紫外可见分光光度计在较大稳定吸收波长处测定吸光度值，对照芦丁标准曲线，测得总黄酮的含量。

与现有技术相比，本发明技术可大幅提高菜芙蓉黄酮提取率，同时能降低产品中大分子糖类、蛋白质的含量，降低产品中金属离子和无机盐含量，提高产品纯度。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，其目的仅在于更好理解本发明的内容而非限制本发明的保护范围：

实施例1

将菜芙蓉花烘干粉碎过60～100目筛，取菜芙蓉花粉末10g放入40mL质量浓度为80％的乙醇溶液中浸泡1h，然后调节微波功率200W，采用微波提取30min，过滤得到菜芙蓉总黄酮提取液；

将菜芙蓉提取液先通过截留分子量为30000Da的聚砜中空纤维膜，跨膜压差为0.25MPa收集透过液；再通过截留分子量为6000Da的聚砜中空纤维超滤膜，跨膜压差为0.25MPa收集透过液；最后通过截留分子量为200Da的聚酰亚胺纳滤膜浓缩，跨膜压差为2.0MPa，收集浓缩液，得到菜芙蓉总黄酮浓缩液；