[发明专利]一种动物组织DNA的保存方法

说明书

技术领域

本发明属于生物组织固定技术领域，具体涉及一种动物组织DNA的保存方法。

背景技术

目前对于动物组织的保存方法主要存在以下三种：

（1）酒精固定组织保存法

在科学研究和动物遗传资源保护中，常采用将获取的新鲜动物组织，如肌肉，取适量加入到无水酒精或者体积分数为95%的酒精中保存，以达到保存动物DNA等遗传信息的目的，此种方法因取材量少且样品保存质量好，能够满足多数实验的需求而被广泛应用，因此此种方法在实验和样品不需要长途运输（如空运）中多被采用。但是酒精保存的样品存在如下缺点：（1）酒精价格较贵，若采用大批量保存时和整个样品保存时，成本较高；（2）酒精易挥发，固定样品后要经常更换固定液；（3）酒精为易燃品，不适宜长途运输或空运（为违禁品）；（4）在野外实验和采样中，需要酒精的量比较大，而大量携带酒精也不现实，尤其在偏远地区，酒精更不易获得；（5）酒精固定之后的样品多需要在低温条件下保存，才能达到长期保存的目的。

（2）低温保存法

在研究中，也有采用将需固定组织保存在低温的条件下（-20℃一般冰箱，或-80℃超低温冰箱，或-196℃液氮中），以抑制体内的各种酶的活动，达到长期保存组织的目的，但是此种方法也存在以下缺点：（1）此种方法需要特殊设备，且超低温冰箱和液氮罐等成本较高，其存储空间也有一定的局限性；（2）存储设备要持续供电，一旦发生较长时间断电，样品可能腐坏，不能用于后续实验；（3）此种方法不适宜野外采样，仅适用于实验室内少量保存样品。

（3）RNA保存试剂及低温保存法结合

采用将样品加入到保存试剂，如RNAlater中，4℃保存过夜，之后移入低温保存设备中长期保存，这些样品不仅可以应用于RNA实验，且同时其离心后分层悬浮液也可以用于DNA的提取。但是此种方法也存在如下缺陷：（1）试剂成本比较高，如RNAlater进口试剂价格约为1000元/100mL，而国产的价格也要200元/100mL，远远高于酒精的保存方法；（2）用以上试剂之后仍需将样品保存在低温条件下，所以仍存在低温保存的诸多局限性；（3）此种方法主要用于保存动物的RNA组织，而DNA一般在RNA提取后的残余液体中，其DNA有较大一部分在RNA提取过程中损失掉了，不能满足DNA实验的后续实验需求。

以上三种组织的保存方法都存在一定的缺陷，因此，有必要研制一种使用方便且成本低廉的动物组织的保存方法以解决上述技术问题，尤其是解决长途运输中存在的问题。

发明内容

本发明为解决现有酒精固定样品的酒精在野外环境下不易获得、成本高、长期保存易挥发及不能空运等缺陷，提供了一种试剂廉价易得且使用安全方便的动物组织DNA的保存方法。

本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种动物组织DNA的保存方法，其特征在于：将动物新鲜组织或冷冻组织切成组织块后用食盐干粉或氯化钠干粉沾满组织表面或者将动物新鲜组织或冷冻组织置于质量浓度为10%-36.5%的氯化钠溶液中即能实现动物组织的长期保存。

进一步优选，所述的氯化钠溶液的质量浓度为10%。

本发明与现有技术相比具有以下有益效果：（1）所需试剂经济安全，固定后样品可以空运；（2）扩增效率高，测序结果可靠，适宜野外采样；（3）所需试剂来源稳定，分布广泛，方法简单易行；（4）氯化钠和食盐可以相互替换，且在采用高盐法提取DNA时，均不影响后续实验结果。

附图说明

图1是基因组提取和PCR扩增结果电泳检测图。M为marker，其条带长度从上到下分别为2000bp，1000bp，750bp，500bp，250bp，100bp。图1A 中X1、X2为新鲜鲫组织，F1、F2为同一条鱼未加任何固定剂的组织用酚-氯仿法提取后电泳检测图。图1A 中73、74、75、76分别是X1、X2、F1、F2的RH引物PCR扩增产物；77、78、79、80是X1、X2、F1、F2的RAG引物PCR扩增产物。图1B中81、82、83、84为X1、X2、F1、F2的Cytb引物的PCR扩增产物；85、86、87、88为X1、X2、F1、F2的COI引物PCR扩增产物。

图2是酚-氯仿法提取的基因组DNA电泳检测图。M：marker；N：NaCl干粉；C：无水乙醇；S：食盐干粉；10：10%的NaCl溶液；15：15%的NaCl溶液；20：20%的NaCl溶液；25：25%的NaCl溶液；30：30%的NaCl溶液；36.5：36.5%的NaCl溶液。