[发明专利]生产连续细胞系的方法

说明书

本申请是国际申请日2009年2月20日、国际申请号PCT/US2009/034732于2010年8月25日进入中国国家阶段、申请号200980106313.2、发明名称“生产连续细胞系的方法”的申请的分案申请。

发明领域

本发明涉及生产细胞系的方法。

发明背景

细胞系已成为用于疫苗制造的有价值的工具。一些重要疫苗和病毒载体的生产仍然在鸡胚或鸡胚原代成纤维细胞中进行。用于病毒复制的禽类原代组织由SPF(无特定病原体)生产厂提供。SPF来源的组织昂贵，并且原料供应的质量通常难以控制。因此，供应的不一致性和短缺是基于SPF蛋技术的最主要缺点。对于使用原代成纤维细胞单层培养物的方法来说，同样也是这样。为了无限地增殖细胞系，需要将细胞永生化。目前使用的大多数永生化细胞系是癌细胞或融合的杂交瘤细胞的后裔。但是，后一种技术受到与骨髓瘤细胞融合的限制。不存在能够产生不同类型的永生化细胞的通用技术。

发明简述

本发明的目的是从不连续的细胞材料生产连续细胞。具体来说，目的是提供不引入外来病毒基因的具有增殖潜力的连续细胞系。

因此，本发明提供了一种用于生产连续细胞系的方法，所述方法包括提供动物或人类的活细胞，用紫外光辐照所述细胞，增殖所述细胞，以及选择在至少20次传代后能够增殖的细胞作为连续细胞系的细胞。

这样的连续细胞系是能够增殖并用于生物分子例如蛋白质的重组表达，或用于制造病毒产品例如病毒抗原或完整病毒群，特别是用于疫苗接种目的的细胞的培养物。

因此，本发明还提供了一种生产病毒的方法，所述方法包括提供可通过本发明的方法获得的连续细胞系的细胞，用所述病毒感染所述细胞，在所述细胞中增殖所述病毒，以及收集所述病毒。

另一方面，本发明提供了一种生产重组基因产物的方法，所述方法包括提供可通过本发明的方法获得的连续细胞系的细胞，用编码所述基因产物的核酸转染细胞，表达所述基因产物，以及任选地收集所述基因产物。

另一方面，本发明提供了可以通过一种方法获得的连续细胞系，所述方法包括提供动物或人类的活细胞，用有效剂量的紫外光辐照所述细胞，增殖所述细胞，以及选择在至少20次传代后能够增殖的细胞作为所述连续细胞系的细胞。

附图说明

图1显示了UV处理步骤的流程。

图2显示了鹌鹑的连续细胞培养物。

图3显示了生产鹌鹑连续细胞系的系统树以及处理路线。

图4显示了采用用于生产连续细胞的设置，UV剂量与辐照时间的相关性。

发明详述

本发明提供了通过细胞的UV处理来生产连续细胞系。