[发明专利]一种体外筛选和检测抗奶牛子宫内膜炎药物的方法

权利要求书

1.一种体外筛选和检测抗奶牛子宫内膜炎药物的方法，其特征在于：是将体外培养的奶牛子宫内膜上皮细胞进行炎性化，再加入待检药物，通过检测细胞中炎症蛋白的表达变化，来确定待检药物的抗炎活性：若炎症蛋白表达量降低，则待检药物具有抗炎活性，且表达量降低倍数为待检药物相对抗炎活性大小；反之则无抗炎活性；其中，所述炎症蛋白为乳铁蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述待检药物为中药或天然产物。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述检测为荧光检测。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：步骤如下：

（1）细胞培养；

（2）细胞炎性反应诱导，使之成为炎性细胞；

（3）待检药物处理炎性细胞：将待检药物加入到炎性细胞培养液中培养；

（4）细胞及其蛋白质固定；

（5）封闭；

（6）抗原抗体反应：加入带有荧光素标记的炎症蛋白抗体，进行反应；

（7）荧光信号检测、数据计算和结果分析。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述细胞及其蛋白质固定是用三氯醋酸缓冲液进行了固定。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（7）中所述数据计算的公式为：

，其中n为药物处理的复孔数；P为阳性对照组的光吸收总和；N为空白对照组各孔光吸收总和，X为同一药物处理复孔的光吸收总值，Y为药物的抗炎活性比值。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：当Y≥1时，则待检药物无抗炎活性；当Y<1时，则待检药物有抗炎活性；当Y≤0.5时，则待检药物有显著抗炎活性。

8.根据权利要求1-7所述的方法，其特征在于：所述体外筛选和检测为体外高通量筛选和检测，使用多孔板同时培养细胞，在其中加入不同待检药物。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述多孔板为适用于荧光检测的黑边底透光的微孔板。