[发明专利]嵌合抗原受体hCD19scFv-CD8α-CD28-CD3ζ及其用途

说明书

本发明公开了一种嵌合抗原受体hCD19scFv‑CD8α‑CD28‑CD3ζ及其用途，该嵌合抗原受体由抗人CD19单克隆抗体HI19a轻链和重链可变区(hCD19scFv)、人CD8α铰链区、人CD28跨膜区和胞内区、以及人CD3ζ胞内区结构串联构成。该嵌合抗原受体用于修饰T淋巴细胞，修饰后的T细胞(CAR‑T细胞)能用于表面CD19阳性的肿瘤的治疗。

技术领域

本发明涉及肿瘤的细胞免疫治疗领域。利用基因工程技术获得编码嵌合抗原受体hCD19scFv-CD8α-CD28-CD3ζ的融合基因，将该基因片段插入慢病毒表达载体，包装成慢病毒，感染人T细胞，使T细胞表达该嵌合抗原受体。这种嵌合抗原受体T细胞能够识别肿瘤细胞表面的CD19，特异性杀伤CD19阳性的肿瘤细胞，用于肿瘤的治疗。

背景技术

肿瘤特异性T细胞介导的免疫反应是机体清除肿瘤细胞的主要手段，在正常的免疫反应中，抗原特异性T细胞需要至少两个信号的刺激才能进行增殖并对抗原产生免疫应答。第一个信号是T细胞受体(TCR)及MHC-Ⅰ或Ⅱ类分子识别肿瘤特异性抗原，第二个信号是由T细胞与抗原提呈细胞(APC)或其它细胞表面的共刺激分子对所介导。肿瘤细胞通过下调参与T细胞识别及抗原反应的分子表达、降低免疫原性等途径产生免疫逃逸，从而使机体的免疫系统不能很好的清除肿瘤。

研究发现，以肿瘤特异性单克隆抗体的单链可变区(scFv)取代TCR的α，β链可变区，并将scFv直接和共刺激分子(如CD28、4-1BB等)以及T细胞信号传导区域CD3ζ连接，形成嵌合抗原受体(CAR)表达于T细胞表面，可通过scFv识别肿瘤特异性抗原，直接产生T细胞活化的第一、第二信号，促进T细胞活化、增殖，特异性杀伤肿瘤细胞。该过程主要依赖CAR-T细胞表面的scFv对肿瘤抗原的特异性识别，免疫反应的特异性和杀伤性较强。

急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)以及B细胞淋巴瘤的临床治疗，目前以化疗、干细胞移植及生物治疗等为主，虽然可以取得一定的疗效，但复发难治仍然是难以攻克的重点，肿瘤的细胞免疫治疗作为一种新的治疗策略，成为当今研究的热点。CD19几乎表达于所有的B细胞肿瘤细胞表面，而其他实质细胞和造血干细胞几乎不表达，因此作为B细胞肿瘤抗原的特异性高。利用抗CD19scFv构建的嵌合抗原受体hCD19scFv-CD8α-CD28-CD3ζ表达于T细胞表面，可使T细胞特异性杀伤CD19阳性的肿瘤细胞，国外已经有临床实验报道抗CD19-CAR-T细胞在B细胞肿瘤中的应用取得了较好的疗效。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种应用抗CD19scFv构建出的抗CD19嵌合抗原受体(hCD19scFv-CD8α-CD28-CD3ζ)，表达该嵌合抗原受体的T细胞也具有其独特性，初步研究其肿瘤特异性杀伤功能，以进一步探讨其在临床治疗中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种嵌合抗原受体hCD19scFv-CD8α-CD28-CD3ζ，所述嵌合抗原受体由抗人CD19单克隆抗体HI19a轻链和重链可变区hCD19scFv、人CD8α铰链区、人CD28跨膜区和胞内区、以及人CD3ζ胞内区结构串联构成；所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

所述嵌合抗原受体的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述嵌合抗原受体含有针对人CD19抗原的单链抗体hCD19scFv，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，该单链抗体的轻链和重链之间有个Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly GlyGly Ser Gly Gly Gly Gly Ser连接肽。

所述嵌合抗原受体含有针对人CD19抗原的单链抗体hCD19scFv，其核酸序列如SEQID NO.4所示。