[发明专利]一种河豚毒素的检测方法

权利要求书

1.一种中国鲎和圆尾鲎体内的河豚毒素的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)标准贮备液的配制

精密称量TTX 1.0mg置于5ml离心管中，用1ml移液枪吸取1.0mL的浓度为0.2％醋酸，使其溶解后即得1.0mg/mL的TTX贮备溶液，置于冰箱中保存；

(2)样品的前处理

取中国鲎或圆尾鲎待测组织10g，剪碎后加10ml pH＝3.5浓度为0.1％的醋酸于玻璃匀浆器中匀浆，充分匀浆后将样品置于烧瓶中，加50ml浓度为0.1％的醋酸，然后在水浴锅中沸水浴10-20分钟，边加热边搅拌，转速控制在150-200r/min，冷却后用0.45μm滤膜真空抽滤，将滤液放入蒸发皿中，在60-70℃的水浴锅上进行蒸发浓缩，直至10ml，然后过滤定溶至10ml，将浓缩的滤液10ml放在离心管中，经10000r/min的速度，离心15分钟，取上清液经0.22μm的微孔滤膜过滤后，放入干净的离心管中，作为液相色谱待测液；

(3)液相色谱测试

醋酸流动相色谱条件固定相：SunFire^TMC18色谱柱，直径4.6mm×长度150mm，进样量为20μ；流动相：0.2％醋酸；流速：0.8mL/min；紫外检测波长：210nm；柱温：25℃；每次进样体积为60μL；pH为3.0；

磷酸流动相色谱条件固定相：SunFire^TMC18色谱柱，尺寸为4.6mm×150mm，进样量为20μl；流动相：0.05mol/L NaH₂PO₄-0.05mol/L Na₂HPO₄，pH＝6.8，庚烷磺酸钠离子对5mM；流速：1mL/min；紫外检测波长为200nm；柱温：25℃；每次进样体积为60μL；pH为6.8。