[发明专利]干细胞无血清培养基

说明书

本发明公开了一种干细胞无血清培养基，由基础培养基和添加物组成，基础培养基为DMEM/F12，添加物包含：血清替代物2～15％(v/v)、维生素C 20～100ug/ml、干细胞生长因子0.5～10ng/ml、人血小板源生长因子5～20ng/ml、L‑谷氨酰胺1～5mmol/ml。采用本发明的干细胞无血清培养基进行细胞培养，具有细胞周期短，增殖能力强，细胞均一性好，纯度高，有效的抑制干细胞的分化和内皮细胞的贴壁生长，保证干细胞的纯度和干性，另外该培养基不含胎牛血清等动物源成分，通过该培养基获得的干细胞适合于临床应用。

技术领域

本发明涉及细胞培养用培养基，特别涉及一种干细胞无血清培养基。

背景技术

细胞培养在干细胞冻存中广泛应用。在传统培养过程中通常需要添加一定量的胎牛血清，血清中含有细胞生长所需的生长因子、激素、载体蛋白、贴壁因子、微量元素以及其他营养物质，可以促进细胞生长。但是，在规模化生产和实际应用中，血清的添加存在如下缺点：

1)血清易受病毒、支原体或其他病原体的污染；

2)不同批次的血清之间的质量差异造成最终产品批次间的质量差异；

3)大量血清的存在增加生产后期纯化的难度，增加工艺流程、提高生产成本，回收率降低；

4)部分血清成分难以彻底去除，严重影响最终产品质量，具有安全隐患。

为了克服血清添加带来的上述缺陷，自上世纪八十年代起许多科研单位或生物医药公司就相继开发出了若干无血清培养基，如Sigma公司旗下JRH公司生产的Excell系列无血清培养基，Invitrogen公司旗下Gibco公司生产的VP-AGT系列无血清培养基等等。但是，上述无血清培养基未针对不同细胞进行分化，用于干细胞培养仍存在一些问题，如干细胞易发生分化、干细胞的纯度及干性低。

发明内容

本发明的目的是提供一种干细胞无血清培养基，采用本发明的干细胞无血清培养基进行细胞培养，具有细胞周期短，增殖能力强，细胞均一性好，纯度高，有效的抑制干细胞的分化和内皮细胞的贴壁生长，保证干细胞的纯度和干性，另外该培养基不含胎牛血清等动物源成分，通过该培养基获得的干细胞适合于临床应用。

为实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种干细胞无血清培养基，由基础培养基和添加物组成，基础培养基为DMEM/F12，添加物包含：血清替代物2～15％(v/v)、维生素C 20～100ug/ml、干细胞生长因子0.5～10ng/ml、人血小板源生长因子5～20ng/ml、L-谷氨酰胺1～5mmol/ml。

在一些实施方式中，无血清培养基由基础培养基和添加物组成，基础培养基为DMEM/F12，添加物包含：血清替代物5％(v/v)、维生素C 50ug/ml、干细胞生长因子2ng/ml、人血小板源生长因子20ng/ml、L-谷氨酰胺2mmol/ml。

在一些实施方式中，干细胞无血清培养基用于培养脂肪间充质干细胞。

本发明的有益效果为：

人血小板源生长因子(Platelet derived growth factor，PDGF)是一个具有双链结构的蛋白多肽，是血小板分泌的主要丝裂原，是一个极为重要的、随血循环而行、作用于间充质干细胞的生长因子。它直接促进正常细胞的增殖和分化。人血小板源生长因子有BB、AB、AA三种类型，本发明采用PDGF～BB。