[发明专利]一种高效检测纳米颗粒肾毒性的方法

权利要求书

1.一种高效检测纳米颗粒肾毒性的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1）制备图案化纤维电纺接收板：先在绝缘玻璃片上涂覆正性感光胶，再覆盖一层光掩模，利用光刻机进行刻蚀；再通过直流磁控技术在刻蚀后的玻璃片上沉积一层金属银，所沉积的金属银的形状包括圆形阵列、椭圆形的一种，圆形半径为100 μm-500μm，椭圆长轴为200 μm-600μm，短轴为100 μm-300μm；最后清洗掉剩余的正性感光胶；

2）制备图案化电纺纤维：将医用高分子聚合物用有机溶剂溶解，利用步骤1）所得物作为电纺接收板，通过静电纺丝技术制备圆形或椭圆形的图案化电纺纤维；控制所得纤维的直径为300-500 nm；

    所述医用高分子聚合物包括聚乳酸、聚己内酯、聚氨酯、聚丙烯腈中的一种，所述有机溶剂包括丙酮、二甲基甲酰胺中的至少一种；

3）将负性环氧树脂型近紫外线光刻胶SU-8放置在硅片上，利用光刻蚀技术，保留宽为40-550μm、高为30-80μm的SU-8长方体作为模具，去掉其余的SU-8，；将熔融的PDMS置于所得模具上，待PDMS冷却后，去除模具，得到PDMS腔体；

4）将步骤2）和步骤3）所得物在O₂ 或N₂的氛围下，用等离子体处理30秒，使得步骤2）和步骤3）所得物紧密连接；

5）将0.5×10⁶-1.5×10⁶个原代肾小管上皮细胞接种于步骤4）所得物中的图案化电纺纤维上，利用注射泵将培养基泵入步骤4）所得物的腔体，流速为0.2-0.5 ml/h；再将纳米颗粒悬浮于PBS后泵入,于纳米颗粒泵入后，记录原代肾小管上皮细胞的存活率、细胞形态学、乳酸脱氢酶、谷胱甘肽、丙二醛、超氧化物歧化酶的测定结果、细胞凋亡和周期的变化、细胞内氧自由基、酶活力、特征基因表达水平，得出纳米颗粒的毒性；

所述纳米颗粒包括纳米四氧化三铁、纳米二氧化钛、纳米氧化锌、纳米二氧化硅、纳米银颗粒中的一种。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）中沉积的金属银的形状为椭圆形，椭圆长轴为200 μm-600μm，短轴为100 μm-300μm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中，进行电纺时，电压为15-25 KV，流速为0.5-1.0 ml/h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中，纤维的直径为300 nm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中的医用高分子聚合物为聚乳酸，所述有机溶剂为丙酮与二甲基甲酰胺的混合溶液，丙酮与二甲基甲酰胺的体积比为9:1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中的模具的宽为200 μm，高为50 μm。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中的模具的宽为50 μm，高为80 μm。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5）中，用于接种的原代肾小管上皮细胞的数目为1×10⁶个。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5）中，培养基的流速为0.3 ml/h。