[发明专利]一种同时分离藤黄中四种藤黄酸类成分的方法

权利要求书

1.一种同时分离藤黄中四种藤黄酸类成分的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将藤黄原药材粉碎，定量称取1Kg，置于20L提取罐中，10L丙酮提取两次，每次3h，过滤，合并两次的滤液，得提取液；

S2、将步骤S1所得的提取液减压浓缩至800mL，得到藤黄丙酮浓缩液，加水1600mL，充分搅拌溶解，室温静置24h后，过滤，得不溶物；

S3、往步骤S2所得的不溶物中加入40％的丙酮溶液，直至不溶物完全溶解后，用高速离心机离心，得上清液；

S4、将步骤S3所得的上清液进样到已处理好的BS-16型大孔树脂层析柱中，依次用3倍柱体积的蒸馏水洗脱，3倍柱体积40％丙酮洗脱，3倍柱体积100％丙酮洗脱，得藤黄酸类大孔树脂洗脱液，浓缩至浸膏状，用乙醇溶解；

S5、取步骤S4所得的溶液采用制备液相色谱分离，首先用初始流动相平衡色谱柱20min，每次进样体积5mL，按设定梯度洗脱，紫外检测器实时监控，收集保留时间为8.0min、10.3min、17min的3个组分，其中，保留时间为17min的样品为保留时间为17.5min与17.9min的混合样品；20min以后，按照梯度初始比例平衡色谱柱，再次进样，共进样6次，将收集得到的洗脱组分按保留时间合并相同部分，浓缩，减压回收，室温静置8h，析出大量粉末，过滤，50℃干燥12小时，得产品，其中，保留时间8.0min为2α-羟基-3β-乙酰氧基白桦脂酸，10.3min为新藤黄酸；

S6、将步骤S5所得的保留时间为17min时所收集样品，用乙醇溶解成浓度为5mg/mL的样品，在步骤S5所述条件下反复进样多次，每次进样体积1mL，收集保留时间为17.5min和17.9min的流出液，流出液减压浓缩，室温静置8h，析出粉末，过滤，50℃干燥12小时，得R-藤黄酸和S-藤黄酸；

S7、所得各组份产品经HPLC纯度分析为98.5％；分析条件为：c18，5μm，250mm×4.6mm，流动相为乙腈∶水∶磷酸＝85∶14.8∶0.2，检测波长为360nm，流速为1mL/min，柱温为25℃。

2.根据权利要求1所述的一种同时分离藤黄中四种藤黄酸类成分的方法，其特征在于，所述步骤S3中高速离心机的频率为25000r/min。

3.根据权利要求1所述的一种同时分离藤黄中四种藤黄酸类成分的方法，其特征在于，所述步骤S5中的色谱柱为c18，10μm，250mm×50mm；紫外检测波长为360nm；洗脱流速为60mL/min；洗脱梯度为：洗脱剂采用乙腈-水-磷酸体系，首先用体积百分比为70％的乙腈，体积百分比为0.2％的磷酸洗脱；再用体积百分比为80％的乙腈，体积百分比为0.2％的磷酸洗脱；最后用体积百分比为95％乙腈，体积百分比为0.2％的磷酸洗脱，20min完成一个分离周期。

4.根据权利要求1所述的一种同时分离藤黄中四种藤黄酸类成分的方法，其特征在于，所述步骤S5中的产品为：保留时间8.0min为2α-羟基-3β-乙酰氧基白桦脂酸，10.3min为新藤黄酸，17min为R-藤黄酸和S-藤黄酸两种异构体的混合物。