[发明专利]杂交瘤细胞株Zj/2D8及其检测尼克酰胺‑N‑甲基化酶抗原的应用

权利要求书

1.一株杂交瘤细胞株Zj/2D8，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2013年10月22日，保藏编号为CCTCC NO：C2013149，保藏地址为中国武汉，武汉大学，邮编430072。

2.一种权利要求1所述杂交瘤细胞株Zj/2D8在制备检测尼克酰胺-N-甲基化酶抗原的试剂盒中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用是提取杂交瘤细胞株Zj/2D8中的尼克酰胺-N-甲基化酶抗体，再用尼克酰胺-N-甲基化酶抗体检测待测样品中尼克酰胺-N-甲基化酶抗原含量。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述尼克酰胺-N-甲基化酶抗体的提取方法为：(1)将杂交瘤细胞株Zj/2D8用含10％胎牛血清的1640培养液，在37℃，含5％CO₂的细胞培养箱内扩大培养，收集细胞，用PBS配制成0.4×10⁶/ml的细胞液，再将细胞液腹腔注射石蜡致敏的BALB/c小鼠，每只注射1ml，接种后9天收获腹水，1200转/分钟离心，除去沉淀，收集上清液；

(2)向步骤(1)收集的上清液中加入2倍体积的pH 5.0、0.06mol/L醋酸钠缓冲液，再用1mol/L HCl调pH至4.8，制成稀释上清液；然后按每毫升稀释上清液中加11μl辛酸的比例，室温搅拌下向稀释上清液中逐滴加入辛酸，于30分钟内加完，4℃静置2小时，取出，15000g离心30分钟，弃沉淀；上清经125μm尼龙筛过滤后，滤液加入1/10体积的0.01mol/L PBS，用1mol/L NaOH调pH至7.2；在4℃下加入硫酸铵至45％饱和度，搅拌30分钟，静置1小时，10000g离心30分钟，弃上清，沉淀以含137mmol/L NaCl+2.6mol/L KCl+0.2mmol/L EDTA的PBS为透析液进行透析，4℃过夜，直至用10g/L BaCl₂水溶液检测截留液无SO₄离子，取出截留液，10000g离心30分钟，除去不溶性沉渣，上清即为尼克酰胺-N-甲基化酶抗体。