[发明专利]一种当归酸性多糖组分及其提取方法与应用

权利要求书

1.一种当归酸性多糖组分的提取方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)脱脂：将当归根粉碎成粉，用有机溶剂回流、浸渍或渗漉提取进行脱脂处理，弃提取液，脱脂后的当归根渣备用；

(2)碱水提取：将所述脱脂后的当归根渣干燥后，用相当于其重量4～10倍的碱水70～100℃下回流1～5h提取2～3次，合并水提液，将其减压浓缩至相当于原体积1/4～1/30的提取浓缩液，4℃预冷2～24小时；

(3)沉淀析出：搅拌下向所述提取浓缩液加入1～5倍体积的甲醇、乙醇或丙酮，4～10℃静置4～24小时后，析出沉淀，1000～6000g离心3～20分钟，沉淀备用；

(4)除蛋白：将离心后的沉淀采用Sevag法、反复冻融法或等电点沉淀法一种或多种方法合用除蛋白直至紫外检测无280nm的蛋白吸收峰，离心除去沉淀，保留水相；

(5)小分子杂质的去除：用截流分子量2000-8000Da的透析膜对所述水相进行水透析除去小分子杂质，收集透析袋内溶液，将其减压浓缩至相当于原体积1/2～1/50的浓缩液，备用；

(6)分级：将步骤(5)所述浓缩液8000～10000g离心后，上DEAE-sephadex A-25或DEAE-纤维素柱，用水洗脱至苯酚-硫酸法显色无黄色出现；再用0.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，至苯酚-硫酸法显色无黄色出现，收集氯化钠水溶液洗脱液，将其减压浓缩至相当于原体积1/2～1/50的洗脱浓缩液；

(7)纯化：将所述洗脱浓缩液8000～10000g离心后，上Sephadex G-200、Sephadex G-100、Sephadex G-75、Sephacryl S-400或Sephrose CL-6B凝胶柱，用水洗脱，收集分子量50kD以上组分的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，即得当归酸性多糖组分。

2.根据权利要求1所述的当归酸性多糖组分的提取方法，其特征在于：步骤(1)中所述有机溶剂为甲醇、50～100％乙醇、乙醚或石油醚。

3.根据权利要求1或2所述的当归酸性多糖组分的提取 方法，其特征在于：所述步骤(1)中用相当于当归根重量2～8倍的80-100％乙醇在80～100℃加热回流提取1～2小时，共提取2次进行脱脂处理。

4.根据权利要求1所述的当归酸性多糖组分的提取方法，其特征在于：步骤(2)中所述碱水为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、氨水中的一种或两种的混合水溶液。

5.根据权利要求1所述的当归酸性多糖组分的提取方法，其特征在于：步骤(2)中所述碱水为0.8～1.2mol/L的氢氧化钠或氢氧化钾。

6.根据权利要求1所述的当归酸性多糖组分的提取方法，其特征在于：

包括如下步骤：

(1)脱脂：将当归根粉碎成粉，用相当于当归根重量2～8倍的80-100％乙醇在80～100℃加热回流提取1～2小时，共提取2次进行脱脂处理，弃提取液，脱脂后的当归根渣备用；

(2)碱水提取：将所述脱脂后的当归根渣干燥后，用相当于其重量4～8倍的0.8～1.2mol/L的氢氧化钠水溶液80～100℃下回流1～3小时提取2～3次，合并水提液，将其减压浓缩至相当于原体积1/4～1/20的提取浓缩液，4℃预冷2～24小时；

(3)沉淀析出：搅拌下向所述提取浓缩液加入2～3倍体积的乙醇，4℃静置4～24小时后，析出沉淀，3000～6000g离心10～20分钟，沉淀备用；

(4)除蛋白：将离心后的沉淀采用反复冻融法和Sevag法除蛋白直至紫外检测无280nm的蛋白吸收峰，离心除去沉淀，保留水相；

(5)小分子杂质的去除：用截流分子量6000-8000Da的透析膜对所述水相进行水透析除去小分子杂质，收集透析袋内溶液，将其减压浓缩至相当于原体积1/2～1/20的浓缩液，备用；

(6)分级：将步骤(5)所述浓缩液8000～10000g离心后，上DEAE-sephadex A-25柱，用水洗脱至苯酚-硫酸法显色无黄色出现；再用0.5mol/L的氯化钠水溶液洗脱，至苯酚-硫酸法显色无黄色出现，收集氯化钠水溶液洗脱液，将其减压浓缩至相当于原体积1/5～1/20的洗脱浓缩液；

(7)纯化：将所述洗脱浓缩液8000～10000g离心后，上Sephadex G-100凝胶柱，用水洗脱，收集分子量50kD以上组分的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，即得当归酸性多糖组分。