[发明专利]用于治疗肝纤维化的结缔组织生长因子嵌合疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明属于肝纤维化治疗药物领域，具体涉及一种用于治疗肝纤维化的结缔组织生长因子嵌合疫苗及其应用。

背景技术

肝纤维化(liver fibrosis)是肝脏对各种原因所致肝损伤的创伤愈合反应，表现为肝内结缔组织增生与沉积。肝纤维化是多种慢性肝病向肝硬化发展必经的病理过程，是决定慢性肝病预后的最主要因素之一。目前，大部分慢性肝病都缺乏有效的病因治疗，而且研究证实部分肝病在病因去除后肝纤维化仍可继续进展，故阻滞或延缓肝纤维化的发生发展，从而防止其进展为肝硬化成为慢性肝病治疗的主要途径之一。但目前尚无真正意义上安全、有效的抗肝纤维化药物或措施，探索安全有效的抗肝纤维化措施是目前肝病学研究领域面临的重要课题。

结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)，是新近发现的一种强力的促进肝纤维化因子，在肝纤维化发生发展过程中起着中心作用。CTGF是分泌型蛋白，是高度保守的CCN家族成员之一，具有促进细胞增殖，促进细胞外基质沉积，介导细胞粘附，刺激细胞迁移，促进软骨形成及骨骼发育等多种生物学作用。CTGF在肝纤维化肝组织中表达上调，其表达水平与肝纤维化程度正相关。

乙肝病毒核心抗原(heptitis B core，HBc)是乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)的重要结构蛋白，免疫原性强，是机体CTL识别的主要靶抗原之一。HBc融合异源表位后在原核和真核细胞内均能高效表达，并且可以装配成球形病毒样颗粒(virus-like particle，VLP)。HBc颗粒的TI Ag特性是其再无佐剂时也能诱导Th1应答，且可通过B细胞提呈进而启动T细胞应答，提高HBc免疫原性。融合外源序列的嵌合HBc颗粒可以引起强烈的免疫应答反应，明显提高插入序列的免疫原性。HBc的N端、C端及MIR(major immunodominant region)区均可供外源短肽插入，并维持正确的构象，增强其免疫原性，但MIR区的免疫原性更强。HBc颗粒载体由于其强力的免疫原性在疫苗研究中具有重要价值。

将自体蛋白的抗原表位插入乙肝病毒核心抗原的MIR表位制备成的嵌合疫苗是一种新型疫苗。这种新型疫苗借助HBc颗粒载体打破机体对自体蛋白质的免疫耐受，使机体发生针对自体蛋白特定的抗原表位的免疫应答。刺激机体产生的抗体可以有效地结合靶蛋白，并且中和该靶蛋白的生物学活性。这些特点使得嵌合疫苗在疾病治疗中极具应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于治疗肝纤维化的结缔组织生长因子嵌合疫苗及其应用。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种嵌合疫苗，该嵌合疫苗是将结缔组织生长因子的抗原表位插入乙肝核心抗原的c/e1B细胞表位中装配而成；所述结缔组织生长因子的抗原表位的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

所述c/e1B细胞表位为乙肝核心抗原的第79至第81位氨基酸。

结缔组织生长因子的抗原表位插入乙肝核心抗原的c/e1B细胞表位中，装配成乙肝核心病毒样颗粒的嵌合疫苗。

所述乙肝核心病毒样颗粒是由180或240个乙肝核心抗原组成的亚单位构成。

所述的乙肝核心抗原是含有第1至第149位氨基酸的截短型分子。

本发明的嵌合疫苗在制备抗肝纤维化的药物中的应用。

所述的药物为抑制肝脏肝星状细胞激活程度的药物。

所述的药物为刺激肝细胞增殖的药物。

所述的药物为抑制肝细胞凋亡的药物。

所述的药物为降低肝组织中TGF-β1、PDGF及TIMP-1蛋白质表达水平的药物。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明公开了一种用于治疗肝纤维化的CTGF嵌合疫苗，通过将CTGF的抗原表位插入乙肝核心抗原的c/e1B细胞表位，构建可以装配成乙肝核心样颗粒的CTGF嵌合疫苗。该嵌合疫苗在无佐剂的辅助下，仍然可以刺激机体产生高效价的抗CTGF中和性抗体。用该嵌合疫苗免疫后的小鼠，经四氯化碳诱导后产生的肝纤维化程度明显减轻。