[发明专利]冬青素A在制备抗肿瘤药物中的新应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及冬青素A在制备多种抗恶性肿瘤药物中的新用途。

背景技术

山绿茶(llexhainanensis Merr)是提取自冬青科冬青属植物海南冬青的叶(Johji Yamahara等.Photochemistry,1987,26(7):2023-2027)。已有报道作为山绿茶的主要有效成分冬青素A具有很强的调血脂作用(Liu Chang等.Organic&biomolecular chemistry,2013,11:4993-9)。在先的中国专利申请(申请号201410146662X)公开了冬青素A在制备抗肿瘤药物中的用途；但仅证明了在制备抗皮肤癌、肺癌及胃癌药物中的应用，但是否有抑制其他肿瘤的活性，却有待研究。本发明人系统地研究了冬青素A对多种实体瘤以及离体培养的人源肿瘤细胞的抑制作用，并首次发现冬青素A特别对肝癌Hepge2荷瘤小鼠实体瘤具有很强的抑制作用。

发明内容

本发明目的是提供冬青素A的新用途。

本发明提供了化合物冬青素A在制备肝癌、乳腺癌、肠癌、前列腺癌、食道癌、子宫癌等恶性肿瘤药物中的新应用。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明公开了冬青素A在制备体内外抑制肝癌生长药物中的应用。所述体内外抑制肝癌生长是指体内抑制肝癌实体瘤增长或体外抑制肝癌细胞增殖。

本发明公开了冬青素A在制备体外抑制肿瘤细胞增殖药物中的应用。所述体外抑制多种肿瘤细胞增殖是指对食管癌，结肠癌，前列腺癌，乳腺癌，宫颈癌，鼻咽癌、淋巴癌、肾癌、胰腺癌、膀胱癌或卵巢癌的癌细胞的增殖有抑制作用。

通过肿瘤细胞的离体培养实验，检测冬青素A抗多种肿瘤活性，再通过整体动物实验验证其抗实体瘤活性。体外细胞实验筛选了冬青素A对肝癌细胞SMMC-7721，HepG2，Hep3B,乳腺癌MDA-MB-231，结肠癌HT-29、HCT-116，前列腺癌PC-3，宫颈癌Hela，食管癌TE-1，鼻咽癌CNE-1、淋巴癌A20、肾癌A498、胰腺癌SW1990、膀胱癌BIU-87、卵巢癌SKOV-3等多种肿瘤细胞的抑制作用。整体荷瘤实验表明冬青素A对肝癌HepG2荷瘤小鼠实体瘤生长具有明显抑制作用。

附图说明

图1是冬青素A对肝癌、乳腺癌、肠癌、前列腺癌、宫颈癌等肿瘤细胞的半数致死量IC50作用。

图2是冬青素A对肝癌Hepge2荷瘤小鼠体重影响。

图3是冬青素A对肝癌Hepge2荷瘤小鼠实体瘤的抑制作用。图中：Iex A代表冬青素A，与空白对照组比较，^#p＜0.05，^##p＜0.01，^###p＜0.001。

具体实施方式

具体实施例如下：

实施例1冬青素A对体外培养的多种肿瘤细胞的抑制作用

实验方法(MTT法)：肿瘤细胞株(包括肝癌细胞SMMC-7721，HepG2，Hep3B,乳腺癌MDA-MB-231，结肠癌HT-29、HCT-116，前列腺癌PC-3，宫颈癌Hela，食管癌TE-1，鼻咽癌CNE-1、淋巴癌A20、肾癌A498、胰腺癌SW1990、膀胱癌BIU-87、卵巢癌SKOV-3)按照常规方法培养传代，收集生长在对数生长期的细胞，经0.01％胰酶消化液消化，计数，每孔细胞液体积为100μl接种在96孔板中，5％CO₂培养箱内37℃培养12h。提取自山绿茶(购自广西，经王强教授鉴定为冬青科植物Ilex hainanensisMerr的干燥叶，标本存放于中国药科大学中药分析教研室，标本号为2008-1，2008-2)的活性成分化合物冬青素A设五个浓度梯度，每一浓度设六个复孔，于5％CO₂培养箱内37℃分别培养24，48，72h，加入10μl的5mg/ml MTT。37℃孵育4h后，弃上清，加入100ml DMSO溶解，酶标仪测吸光度值，公式拟合得IC50值。如图1，实验结果表明，冬青素A对肝癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、宫颈癌、食管癌、鼻咽癌、淋巴癌、肾癌、胰腺癌、膀胱癌、卵巢癌等均有一定的抑制作用，并且72h作用更为明显。

实施例2冬青素A对肝癌Hepge2荷瘤小鼠实体瘤生长的抑制作用。

药物溶解：适量0.5％羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na)将冬青素A溶解，稀释至所需浓度供实验用。

采用雄性SPF级C57BL/6J小鼠，体重20±2g，适应性喂养后，随机分组。