[发明专利]镀金铜热电极的制作和在温度可控H2O2传感器上的应用

说明书

技术领域

本发明属于分析检测领域，具体涉及一种镀金铜热电极的制作方法和在温度可控H₂O₂传感器上的应用。

背景技术

过氧化氢(H₂O₂)不仅是一种优良的氧化剂而且是一种重要的化工产品，其可以作为氧化剂、消毒剂，在日常生活、食品加工以及医药等领域有着广泛的应用。如果过氧化氢通过食品进入人体之后，有可能引起消化道的癌变，其也可以加快人体的衰老，与各种病变的发生有着密切的联系。同时在生物体内，H₂O₂与其中间体O ▪自由基是生物体内许多反应的重要产物，H₂O₂也是许多酶促反应过程中的中间代谢产物，其会与许多生物体内的新陈代谢过程有很大的关联性。由于很多细胞都可以产生H₂O₂，而且它具有相对稳定的跨膜输运特性，其对许多生物过程起到了重要的调节作用。但是对绝大多数的生物来说，H₂O₂若含量过高则会对细胞起到毒性作用。另外H₂O₂对人们的日常生活、环境污染以及健康安全等的影响重大，因此对H₂O₂进行快速、灵敏、准确的检测具有很大的意义。

目前，对H₂O₂的检测方法主要是分光光度法、化学发光法、电化学方法以及色谱法。其中电化学分析方法，尤其研究最多的是基于各种过氧化物酶生物传感器，由于其成本低、操作比较简单、灵敏度较高及选择性高而受到广泛关注。

G-四链体-hemin DNA酶，由hemin与富含鸟嘌呤G碱基的DNA序列组成，其具有类似于过氧化物酶的催化活性，其在热力学与动力学都很稳定(Proceedings of the National Academy of Sciences, 1992,Silber K R)，相比于HRP具有显著的优势，已被广泛的用于生化反应(Anal Chem, 2010，Itamar Willner)。

热电极技术主要是通过外加电流的施加使电极表面的温度得以迅速地改变，只是对电极升温而不影响溶液整体的温度，而且不会影响参比电极的电位。本技术采用的是镀金铜热电极，相比于商业化金电极，该铜热电极制作比较简单，电极材料便宜，且铜热电极上镀金工艺比较成熟，因此可以大批量生产。通过热电极技术，改变电极温度可研究DNA酶电催化过氧化氢反应的最适温度，从而实现高灵敏检测过氧化氢。

发明内容

本发明的目的是提供一种镀金铜热电极的制作方法和在温度可控H₂O₂传感器上的应用。基于G-四链体-hemin DNA酶耐高温特性，随着温度的升高（0~50℃），过氧化氢在传感器上的电化学催化响应逐渐增强。使用温度范围广、灵敏度高，可实现过氧化氢的快速检测。

为实现上述目的，本发明采用以下方案：

一种镀金铜热电极的制作方法：将铜热电极在50~60℃镀镍液中以搅拌速度为1000r/min、电流密度为2 A/dm²进行恒电流沉积镍600s，再在3 mM 氯金酸溶液和0.1M NaNO₃溶液的混合溶液中室温下以-0.6V恒电位沉积金400s。

所述的镀镍液：硫酸镍100g/L、柠檬酸钠110~130 g/L、三乙醇胺20~30 g/L、氯化钠10~15 g/L，pH为7.0~7.2。

所述的镀金铜热电极应用于制作温度可控H₂O₂传感器。

所述的镀金铜热电极上修饰G-四链体-hemin DNA酶。具体步骤：室温下镀金铜热电极修饰1µM CP 14 h，得Au-CP修饰电极；用超纯水冲洗干净，在2 mM巯基己醇浸泡1 h，得Au-CP-MCH修饰电极；在E-buffer缓冲液中浸泡1 h，再在20 µM 氯化血红素室温下修饰1h, 得Au-CP-MCH-hemin修饰电极，即在镀金铜热电极上修饰G-四链体-hemin DNA酶。捕获探针CP的序列为：5′-HS-(CH₂)₆-TTTGGGTAGGGCGGGTTGGG-3′。所述的E-buffer缓冲液：HEPES 10 mM、KCl 50 mM，pH=7.2。