[发明专利]一种禽用多联特异性卵黄抗体及转移因子的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于卵黄抗体制备技术领域，具体涉及一种禽用多联特异性卵黄抗体及转移因子的制备方法。

背景技术

在哺乳动物，转移因子和抗体主要富集在淋巴组织、循环血、胎盘及初乳中，哺乳动物的后代通过胎盘和初乳获得和继承母体的免疫防御能力，进而逐渐建立自身的免疫防御系统。在禽类，转移因子和抗体主要富集于卵黄，通过卵黄把母体的免疫防御能力传递给它们的后代。因此，禽类的卵黄是人工提取卵黄抗体和卵黄转移因子的最佳物质。转移因子和抗体可用以防病治病是早已被人们所共识，与传统的化学药物及抗生素比较，它们的优点是无毒副作用、无药物残留，也不会通过生物链损害人类，是一种节能环保、安全有效的防治手段。卵黄抗体除了具有与哺乳动物产生的抗体相同的功能外，还具有比哺乳动物抗体更优越的特性，它耐酸、耐碱、耐高温，便于贮存和运输，它能抵抗胃酸的破坏，所以注射和口服效果均很好。制备卵黄抗体比制备哺乳动物抗体也有更多优越性。制备卵黄抗体不需杀生、只需取高免鸡蛋，取材方便、成本低、产量高、质量优、无菌化处理较方便，所以用卵黄抗体和卵黄转移因子防病治病，是一条优选免疫防疫途径。

迄今，禽用特异性卵黄抗体和卵黄转移因子及制备方面的专利报道较多，但多数是单一疾病的特异性卵黄抗体及卵黄转移因子，2～3联特异性卵黄抗体及卵黄转移因子有少量报道，4联以上特异性卵黄抗体及卵黄转移因的专利未见报道。现有的专利中，特异性转移因子和特异性卵黄抗体都是单独制备，未见采用同一工艺同时生产卵黄抗体和卵黄转移因子的报道。在制备工艺方面，一般采用反复冻融和研磨法破碎卵黄组织细胞，这种方法费时、费力，难于工业化生产。在转移因子分离提取方面，一般都采用透析法进行提取，这种方法需用透析袋，在4℃无菌蒸馏水中进行，生产周期需要48h甚至更长，也难以进行工业化生产。

发明内容

本发明针对现有技术存在的缺陷，提出了一种禽用多联特异性卵黄抗体及转移因子的制备方法，采用同一工艺流程同时制备出特异性卵黄抗体和卵黄转移因子，达到节能、减排、扩能、增效的目的。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种禽用多联特异性卵黄抗体及转移因子的制备方法，具体包括以下步骤：

1)将禽类疾病的疫苗通过腿部或翅下肌注方法，联合免疫产蛋鸡，第一次免疫后7～10d，进行第二次加强免疫，第二次免疫后5～7d，收集含有免疫抗体的鸡蛋；

2)连续收集高免产蛋鸡的鸡蛋，每隔一个月加强免疫一次，再继续收集鸡蛋，直到产蛋鸡被淘汰；

3)将收集的鸡蛋清洗，放入70％酒精浸泡10min，晾干后分离蛋黄；

4)用高压均质机在60Pa条件下进行卵黄组织破碎，加蒸馏水后搅拌均匀；

5)调节卵黄溶液的PH，离心去除沉淀脂蛋白，收取上清液；

6)上清液经压力微孔过滤进一步除去脂蛋白和脂肪，收取滤液；

7)将以上滤液经超滤器进行超滤，收集被截留的液体为特异性卵黄抗体粗制品，滤液为多联特异性卵黄转移因子生物制品；

8)取卵黄抗体粗提液中加冷酒精，使卵黄抗体粗提液质量浓度为50～60％，充分搅拌使其混浊沉淀，在4000r/min离心20～30min，收集沉淀物；

9)加蒸馏水恢复到所取卵黄抗体粗提液体积，然后加冷酒精使其浓度达到25～30％，充分搅拌使其混浊沉淀，在4000r/min离心20～30min，收集沉淀物，重复两次；

10)收取沉淀物，加适量蒸馏水使其沉淀物溶解或在37℃温箱烤干，即为精制多联特异性卵黄抗体。

本发明所述的疫苗为防治禽流感、新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊炎、鸡球虫病、鸡白痢、鸭瘟、鸭肝炎、鸡支原体病或鸡大肠杆菌病中多种的混合疫苗。

本发明步骤(1)中所述的含有免疫抗体的鸡蛋为检测得到抗体效价大于1×10^-4的鸡蛋。

本发明步骤(4)中破碎蛋黄组织与蒸馏水的体积比为1:10～30。

本发明步骤(5)具体为使用盐酸和氢氧化钠溶液调节卵黄溶液的PH为5.4～6.0，在3500～4000r/min离心机离心20～30min，去除沉淀脂蛋白，收取上清液。

本发明步骤(6)所述的压力微孔过滤孔径为0.22μm。

本发明步骤(7)中超滤膜截留分子量为10000Da。