[发明专利]一种检测人复制蛋白变体含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫体外诊断试剂领域，涉及一种检测人复制蛋白变体含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒。

背景技术

人复制蛋白CIZ1(Cip1 interacting zinc finger protein 1)是参与DNA复制的一种核蛋白，它与包括多种癌症在内的很多人类疾病相关。有研究表明,第14、15号外显子发生突变的CIZ1突变体(CIZ1-V)是一个早期肺癌和多种肿瘤生物标记物，以它作为肿瘤特异性检测单标记物，能够不依靠传统医学的侵入性检测手段从风险人群中诊断鉴定出患有早期肺癌的患者。由于目前CIZ1突变体(CIZ1-V)的突变片段多肽序列CDEDEEEIEVRSRDISR很短，一般的检测需要基因测序或侵入性检测手段才能通过PCR等技术进行检测。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述缺陷，提供一种检测人复制蛋白变体含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种检测人复制蛋白变体含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和复制蛋白变体标准品溶液，其中：

所述试剂R1包含电解质、促凝剂、防腐剂及缓冲液；

所述试剂R2包含抗人复制蛋白变体的多克隆抗体包被的胶乳颗粒、电解质、稳定剂、防腐剂及缓冲液；

所述复制蛋白变体标准品溶液为含有不同浓度复制蛋白变体标准品的缓冲液。

优选的，所述的反应缓冲液为PBS缓冲液、Hepes缓冲液、MES缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、醋酸缓冲液或DIPSO缓冲液中的一种或几种，缓冲液浓度在20-200mM之间。

优选的，所述R1中防腐剂优选叠氮钠(NaN₃)，促凝剂选自PEG6000、PEG8000和PEG12000，优选PEG6000或不同PEG的混合体，在试剂R2中的浓度为2.0％-3.5％。

优选的，所述的胶乳颗粒为直径范围0.05-0.20μm的聚苯乙烯胶乳颗粒，试剂R2中胶乳颗粒浓度为0.1％-0.8％。

进一步优选的，所述的胶乳颗粒为直径0.13μm的聚苯乙烯胶乳颗粒，试剂R2中胶乳颗粒浓度为0.2％。

所述的抗人复制蛋白变体的多克隆抗体选自兔、羊、鸡的免疫球蛋白，优选兔抗，经人复制蛋白变体免疫、亲和层析纯化获得的免疫球蛋白；进一步优选合成CIZ1-V第14、15号外显子基因表达的突变片段多肽序列CDEDEEEIEVRSRDISR(SEQ ID NO.1)，将合成的多肽序列偶联至血蓝蛋白载体蛋白上制备抗原并免疫兔、羊、鸡、再经亲和层析纯化获得的免疫球蛋白。

抗人复制蛋白变体的多克隆抗体包被胶乳颗粒是通过化学交联剂在交联缓冲液中进行的，所用化学交联剂为碳化二亚胺(EDAC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，交联缓冲液选自PBS缓冲液、Hepes缓冲液、MES缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、醋酸缓冲液或DIPSO缓冲液，pH在6.0-8.0之间。