[发明专利]胸腺素α1的固相片段合成方法

权利要求书

1.一种胸腺素α1的固相片段合成方法，其特征在于：包括以下步骤：

胸腺素α1为：

Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH，所述胸腺素α1从C端到N端分为C末端片段A、片段B和N末端片段E；所述C末端片段A为6个氨基酸，所述片段B为8个氨基酸，所述N末端片段E为4个氨基酸，所述C末端片段A和片段B在肽序上为连续片段；

所述C末端片段A通过以下工艺获得：

步骤一、将Fmoc-Asn(Trt)-OH、HOBt在溶剂中溶解后，再加入DIC活化形成氨基酸活化液；

步骤二、将所述氨基酸活化液、Wang Resin树脂混合并加入二甲氨基吡啶进行缩合反应获得Fmoc-Asn²⁸(Trt)-Wang Resin，再去除Fmoc保护基；

步骤三、再根据肽序循环步骤一和步骤二，依次将Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH和Fmoc-Val-OH缩合到树脂上，脱除Fmoc得到全保护C末端片段A的肽树脂；

所述片段B通过以下工艺获得：

步骤一、将Fmoc-Val-OH在溶剂中溶解后，加入所需DIPEA总量的2/3，活化形成氨基酸活化液；

步骤二、将所述氨基酸活化液、2-CTC Resin树脂混合并加入剩余1/3DIPEA进行缩合反应获得氨基酸-CTC Resin树脂，再去除Fmoc保护基获得脱保护氨基酸-CTCResin树脂；

步骤三、将Fmoc-Glu(OtBu)-OH与HOBt在溶剂中溶解后，再加入DIC/HOBt活化形成氨基酸活化液；

步骤四、将步骤三所述氨基酸活化液、步骤二的脱保护氨基酸-CTC Resin树脂混合进行缩合反应获得中间氨基酸-CTC Resin树脂；

步骤五、再根据肽序循环步骤三和步骤四，按照肽序依次将若干个氨基酸直到Fmoc-Asp(OtBu)-OH逐步缩合到步骤四的树脂上，再通过体积比为1/4的TFE/DCM溶液将多肽与树脂分离从而获得全保护片段B；

将所述全保护片段B加入DCM/DMSO的混合溶剂，再依次加入DIC/HOBt活化后，再加入所述全保护C末端片段A的肽树脂，缩合反应合成全保护片段C；

按照肽序，在全保护片段C的肽树脂依次将Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH和Fmoc-Ser(tBu)-OH偶联到全保护片段C上，脱除Fmoc保护基团后得到全保护片段D肽树脂；

所述N末端片段E为逐步缩合法依次完成Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH和Fmoc-Ser(tBu)-OH与2-CTC Resin树脂缩合，再将多肽与树脂分离从而获得片段E；

将片段E全溶解于DMF/DCM＝2/1的混合溶剂中，加入HOBt搅拌至全溶，再投入所述全保护片段D肽树脂，得到胸腺素α1肽树脂；

将胸腺素α1肽树脂加入裂解混合试剂，裂解2h，滤除树脂，得到滤液，将滤液缓缓加入至冰冷的无水乙醚中，静置，去除上清液，离心、洗涤、真空干燥得到粗肽胸腺素α1。

2.根据权利要求1所述的胸腺素α1的固相片段合成方法，其特征在于：合成片段A时，制备Fmoc-Asn(Trt)-Wang Resin时，各原料的摩尔比为WangResin/Fmoc-Asn(Trt)-OH/DIC/HOBt/DMAP＝1/2～4/2～4/2～4/0.2～0.4，反应温度为20～35℃，反应时间为1～2h。