[发明专利]基于高通量测序构建鼠BCR轻链Lamda文库的多重PCR引物和方法有效
| 申请号： | 201510027884.4 | 申请日： | 2015-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN104560980B | 公开（公告）日： | 2017-04-05 |
| 发明（设计）人： | 贾罄竹;万瑛;陈钢;于海礼;关鹏;张建阳 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/12;C12N15/10;C12Q1/68;C40B40/08 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司11275 | 代理人： | 王贵君 |
| 地址： | 400038 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 通量 构建 bcr lamda 文库 多重 pcr 引物 方法 | ||
【权利要求书】：
1.基于高通量测序构建鼠BCR轻链Lamda文库的多重PCR引物，其特征在于：所述多重PCR引物如SEQ ID NO.2～SEQ ID NO.13所示。
2.利用权利要求1所述多重PCR引物构建鼠BCR轻链Lamda文库的方法，其特征在于：先提取鼠脾腺组织或外周血总RNA，然后以SEQ ID NO.1为反转录引物合成cDNA，以合成的cDNA为模板，SEQ ID NO.2～SEQ ID NO.13所示序列为引物进行多重PCR，回收PCR产物，将PCR产物进行微乳滴PCR，然后进行PGM测序，得鼠BCR轻链Lamda文库。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述多重PCR的扩增条件为：95℃预变性10min；95℃变性30s，59℃退火90s，72℃延伸90s，循环35次；最后72℃后延伸10min。
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