[发明专利]工程化耐受化疗药物的T-细胞用于免疫治疗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及使用用于免疫治疗的“现成的(off-the-shelf)”异体的(同种异体，allogeneic)治疗性细胞结合化疗以治疗癌症患者。特别地，本发明人开发出工程化(工程改造，工程设计，engineering)异体T-细胞耐受化疗试剂(chemotherapyagent)的方法。通过这种策略获得的所述治疗益处应该会通过化疗和免疫治疗之间的协同效应而增强。特别地，本发明涉及通过失活至少一个编码T-细胞受体组分的基因并且通过修饰(改变，modify)所述T-细胞以赋予耐药性而用于修饰T-细胞的方法。本发明为用于治疗癌症的标准而可负担的过继性免疫治疗(adoptiveimmunotherapy)策略的开辟了通道。

背景技术

过继性免疫治疗，涉及离体(exvivo)产生的自体抗原-特异性T-细胞的转移，是一种很有前途的癌症治疗策略。用于过继性免疫治疗的T-细胞能够通过抗原特异性T-细胞的扩增来产生或通过遗传工程改造而重定向T-细胞来产生(Park，Rosenbergetal.2011)。病毒抗原特异性T-细胞的转移是用于治疗移植相关的病毒感染和罕见的病毒相关的恶性肿瘤的成熟的治疗方案。同样地，肿瘤特异性T-细胞的分离和转移在治疗黑素瘤中已证明是成功的。T-细胞内的新是特异性已经成功地通过转基因T-细胞受体或嵌合抗原受体(CAR)的基因转移产生。CAR是由靶向(targeting)部分构成，该靶向部分在单个信号融合分子中与一个或多个信号区(signalingdomain)结合。CAR已经成功地容许T-细胞针对在来自各种恶性肿瘤(包括淋巴瘤和实体瘤(solidtumor))的肿瘤细胞表面上表达的抗原实现重定向((Jena，Dottietal.2010)。

目前使用过继性免疫治疗用于患者的治疗的方案是基于自体细胞转移。在这种方法中，T淋巴细胞从患者中回收，经体外遗传修饰或选择，如果必要体外(invitro)培养以扩增数量细胞，并且最后注入患者。自体治疗对于实际应用面临着大量的技术和物流障碍(后勤障碍，logistichurdle)，其产生需要昂贵的专用设施和专家人员，它们必须在癌症诊断之后很短的时间内就产生，并在很多情况下，患者的预治疗会导致免疫功能退化，而使患者的淋巴细胞可能功能受损并且以非常低的数目存在。因为这些障碍，每个患者的自体细胞制备实际上是一种新产品，导致效能和安全性大幅变化。

理想的情况下，人们希望使用标准化疗法，其中异体的治疗细胞能够预先生成，详细表征，并可立即给药至患者。然而，异体的T-细胞获自属于相同物种的个体，但遗传上是相异的。因此，异体细胞的内源性TCR特异性会识别宿主组织为外来物，导致移植物抗宿主病(移植抗宿主病，graftversushostdisease)(GvHD)，这可能会导致严重的组织损伤和死亡。T-细胞受体(TCR)是响应抗原的出现参与T-细胞的激活的细胞表面受体。对于免疫球蛋白分子，α和β链的可变区通过V(D)J重组产生，在T-细胞群内产生多种多样的抗原特异性。然而，相对于识别完整抗原的免疫球蛋白，T-细胞通过与MHC分子相连接的处理的肽片段激活，引入通过T-细胞的另一维度的抗原识别，这被称为MHC限制。在供体和受体之间通过T-细胞受体识别MHC差异，会导致T-细胞增殖和GVHD的潜在发展。为了有效地使用异体细胞，本发明人失活了TCRα或TCRβ基因，这导致从T-细胞的表面消除了TCR，从而防止识别同种异型抗原而由此识别GVHD。

虽然在癌症检测和肿瘤细胞生物学的领域取得了优异的进展，但是晚期癌症和转移性癌症的治疗仍然是一个重大的挑战。细胞毒性的化疗药物仍然是最常用的，并成功地用于抗癌治疗。多种细胞毒性药物，如抗代谢物、烷化剂、蒽环类抗生素、DNA甲基转移酶抑制剂、铂化合物和纺锤体毒素已经开发用于杀死癌细胞。然而，它们并不一致有效，并且采用新疗法，如免疫治疗引入这些药物是有问题的。例如，化疗药物可能会由于药物的非特异性毒性曲线而有损于建立稳健的抗肿瘤免疫活性细胞。靶向细胞增殖途径的小分子类疗法也可能妨碍建立抗肿瘤免疫力。然而，如果瞬时有效的化疗方案能够与新的免疫活性细胞疗法组合，则抗肿瘤疗法中的显著进步就可能实现(综述(Dasgupta，McCartyetal.2011))。