[发明专利]使用吸附介质诊断感染性疾病的方法

说明书

本发明提供用于浓缩生物样品中发现的感染性病原体的体外方法，上述生物样品获自怀疑被病原体感染的个体。本文还提供用于减少或消除获自怀疑被感染性病原体感染的个体的样品的血细胞的体外方法。本发明还提供用于诊断疟疾的方法，和用于确定个体是否被病原体感染的方法。本文还提供用于这些方法的浓缩器和试剂盒。

发明背景

本申请要求2013年11月8日提交的美国临时专利申请第61/902,070号的优先权益，在此出于所有目的将其全部并入作为参考。

感染性疾病的早期检测对于控制其传播、指导治疗和改善患者预后来说是必需的。例如，致命病原体爆发的早期准确鉴定可以防止全球大流行的发生。目前许多用于例如病毒(包括埃博拉和相关的线状病毒)或抗药细菌导致的血流感染的诊断方法要求进行至少24小时或更久。在本领域对于使检测个体样品中病原体的存在所需的时间最小化的方法存在需求。目标在于当病原体仍以很低的浓度存在时对其进行检测，如果可能，在临床症状明显之前。然后早期干预可以使感染的强度和持续时间最小化，从而降低发病率和死亡率。

在一些情形中，样品中细胞例如血细胞(例如，红血细胞和白血细胞)的存在降低了测定方法的特异性和灵敏度。目前，不存在用于从生物样品快速分离和收集感染性病原体从而使得病原体可以在以很低的量存在时得以鉴定或分析的手段。此外，在本领域存在对于可以提高检测病原体的现有诊断方法的灵敏度的技术的需求。本发明满足这些及其他需求。

发明概述

一方面，本发明提供用于浓缩生物样品中存在的宽范围的感染性病原体和毒素的体外方法，上述生物样品获自怀疑被所述病原体感染的对象。该方法包括：(a)在形成包括吸附介质和所述病原体的粘附复合物的条件下，使获自对象的生物样品与广谱吸附介质接触；(b)在保持复合物的同时将粘附复合物与样品中没有包括在复合物中的组分分离，例如，通过将粘附复合物用缓冲溶液洗涤；和(d)通过将洗脱缓冲液应用于复合物收集粘附复合物的病原体，从而浓缩洗脱液中的感染性病原体。在一些实施方式中，该方法还包括检测分离的感染性病原体。在一些情形中，检测分离的感染性病原体包括比色测定、免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、基于PCR的测定、任选染色的病原体生长测定或其组合。

在一些实施方式中，洗涤缓冲液是普通盐水溶液。在一些实施方式中，洗脱缓冲液是高离子强度或高渗盐水溶液。

在一些实施方式中，生物样品选自全血、血清、血浆、尿、排泄物、痰、泪、唾液、支气管灌洗液、其他体液及其组合。

在一些实施方式中，吸附介质是其表面上具有至少一种多糖分子吸附剂的高表面积的固体基质。在一些实施方式中，通过端点附着(end-point attachment)将至少一种多糖吸附剂附着于固体基质的表面。在一些实施方式中，至少一种多糖吸附剂是选自肝素、硫酸乙酰肝素、甘露糖、硫酸葡聚糖、透明质酸、水杨酸、壳聚糖及其组合的成员。在一些实施方式中，甘露糖是D-甘露糖或D-甘露糖聚合物。在一些实施方式中，至少一种多糖吸附剂是肝素和甘露糖。

在一些实施方式中，固体基质包括大量刚性聚合物珠。大量刚性聚合物珠可以是刚性聚乙烯珠。