[发明专利]循环肿瘤细胞浓缩分离设备及循环肿瘤细胞的浓缩分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于从源自血液的样品中对肿瘤细胞进行浓缩分离的循 环肿瘤细胞浓缩分离设备。更详细而言，本发明涉及一种能够利用比重差在 离心分离后于肿瘤细胞和其它的血液细胞之间由细胞分离剂形成隔壁的循环 肿瘤细胞浓缩分离设备及分离方法。

背景技术

所谓循环肿瘤细胞(CirculatingTumorCells：CTC)是从原发性肿瘤组织或 转移性肿瘤组织中游离，并浸润到血中，由此分布在外周血中的癌细胞。这 样的循环肿瘤细胞与癌的转移性密切相关。因此，循环肿瘤细胞的检测及其 动态的观察等备受关注。

另一方面，认为循环肿瘤细胞仅以极微量存在于血液中。因此，为了检 测循环肿瘤细胞或者观察循环肿瘤细胞的动态，需要将血液中存在的循环肿 瘤细胞浓缩分离至可观察的浓度。目前，作为血液样品中的循环肿瘤细胞的 浓缩分离方法，提出了各种方法。例如已知为了除去血液细胞即红血球，在 血样品整体中添加溶血剂的方法。然而，存在未发生溶血从而残留的红血球 较多这样的问题。另外，存在无法除去白血球这样的问题。此外，存在若在 源自血液的样品中添加大量的溶血剂则对目标肿瘤细胞的创伤较大这样的问 题。

在下述的专利文献1中，公开有一种使磁珠相对于循环肿瘤细胞上所表 达的上皮细胞粘附分子(EpCAM)反应，将肿瘤细胞与其它的细胞磁分选，选 择性地回收肿瘤细胞的方法。在下述的专利文献2中，公开有一种使用血球 分离过滤器根据细胞的大小分选肿瘤细胞的方法。在下述的非专利文献1中， 记载有一种使用了比重调整为1.077g/mL的分离剂商品的密度梯度离心法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2012-022002号公报

专利文献2：日本特开2013-042689号公报

非专利文献

非专利文献1：GEHealthcareBio-SciencesAB“Instructions71-7167-00AG Ficoll-PaquePLUS”

发明内容

发明所要解决的技术问题

在专利文献1中记载的方法中，只能够检测到源自上皮细胞的肿瘤细胞。 因此，存在肿瘤细胞的回收率较低这样的问题。另外，需要磁标记抗体及磁 石等，操作方法繁杂。此外，检查需要很长时间。

在专利文献2中记载的方法中，由于存在无法用血液分离过滤器回收的 肿瘤细胞，因此，肿瘤细胞的回收率依然较低。此外，有可能无法进行准确 的浓缩分离。

在非专利文献1中记载的方法中，在白血球由分离剂的表面扩散至下方 的情况下，有时比重局部地减少。因此，以免干扰与分离剂的界面，必须载 置血液样品。因此，操作繁杂。另外，肿瘤细胞的回收也需要谨慎的操作。 此外，肿瘤细胞层和分离介质的界面不明确。因此，肿瘤细胞的回收率较低。

本发明的目的在于，提供一种能够解除上述的现有技术的缺点，以简便 的操作、高回收率，而且，在不提高相对于细胞的创伤性的情况下，对源自 血液的样品中的循环肿瘤细胞进行浓缩分离的循环肿瘤细胞浓缩分离设备及 循环肿瘤细胞的浓缩分离方法。

用于解决技术问题的方案

本发明人等鉴于上述技术问题发现：通过使用具备特定比重的具有触变 性的细胞分离剂能够解决上述技术问题。即，本发明为一种循环肿瘤细胞浓 缩分离设备，其用于对源自血液的样品中存在的循环肿瘤细胞进行浓缩分离， 其具备：有底的管状容器，其一端封闭，另一端开口；具有触变性的细胞分 离剂，其被收纳于上述管状容器内，上述触变性能够在离心分离后，使肿瘤 细胞与上述肿瘤细胞以外的血液细胞分离，上述细胞分离剂的比重在1.050～ 1.080的范围内

在本发明的设备的某一特定方式中，上述细胞分离剂的比重在 1.055～1.080的范围内。

在本发明的设备的另一特定的方式中，上述细胞分离剂的比重在 1.065～1.077的范围内。

在本发明的设备的另一特定方式中，上述细胞分离剂含有数均分子量700 以上的聚亚烷基二醇作为触变性赋予剂，且该聚亚烷基二醇以细胞分离剂整 体的5重量％以下的浓度进行配合。

在本发明的设备的某一特定方式中，还含有收纳于上述管状容器内的抗 血液凝固剂。