[发明专利]阳离子神经毒素

权利要求书

1.包含至少一个氨基酸修饰的工程化的梭菌毒素,其中所述的至少一个氨基酸修饰把 所述工程化的梭菌毒素的等电点(pI)增大到一个值，该值比缺乏所述的至少一个氨基酸修 饰、其它方面相同的梭菌毒素的pI高至少0.2个pI单位。

2.权利要求1所述的工程化的梭菌毒素,其中所述的至少一个氨基酸修饰把所述工程 化的梭菌毒素的等电点(pI)增大到一个值，该值比缺乏所述的至少一个氨基酸修饰、其它 方面相同的梭菌毒素的pI高至少0.5个pI单位。

3.权利要求1所述的工程化的梭菌毒素,其中所述的至少一个氨基酸修饰把所述工程 化的梭菌毒素的等电点(pI)增大到一个值，该值比缺乏所述的至少一个氨基酸修饰、其它 方面相同的梭菌毒素的pI高至少1个pI单位。

4.权利要求1所述的工程化的梭菌毒素,其中所述的至少一个氨基酸修饰把所述工程 化的梭菌毒素的等电点(pI)增大到一个值，该值比缺乏所述的至少一个氨基酸修饰、其它 方面相同的梭菌毒素的pI高至少2个pI单位。

5.权利要求1所述的工程化的梭菌毒素,其中所述的至少一个氨基酸修饰把所述工程 化的梭菌毒素的等电点(pI)增大到一个值，该值比缺乏所述的至少一个氨基酸修饰、其它 方面相同的梭菌毒素的pI高2至5个pI单位。

6.前面权利要求任意一项所述的工程化的梭菌毒素,其中所述工程化的梭菌毒素具有 至少为6的pI。

7.前面权利要求任意一项所述的工程化的梭菌毒素,其中所述工程化的梭菌毒素具有 6至10的pI。

8.权利要求7所述的工程化的梭菌毒素,其中所述工程化的梭菌毒素具有7至9，优选8 至9的pI。

9.前面权利要求任意一项所述的工程化的梭菌毒素,其中所述的至少一个氨基酸修饰 选自:氨基酸替换、氨基酸插入和氨基酸缺失。

10.权利要求9所述的工程化的梭菌毒素,其中所述的至少一种氨基酸替换选自:酸性 的氨基酸残基被碱性的氨基酸残基替代、酸性的氨基酸残基被不带电荷的氨基酸残基替代 和不带电荷的氨基酸残基被碱性的氨基酸残基替代。

11.前面权利要求任意一项所述的工程化的梭菌毒素,其中所述工程化的梭菌毒素包 含1至80个氨基酸修饰。

12.权利要求11所述的工程化的梭菌毒素,其中所述工程化的梭菌毒素包含4至40个氨 基酸修饰。

13.前面权利要求任意一项所述的工程化的梭菌毒素,其中所述的至少一个氨基酸修 饰位于所述梭菌毒素的受体结合结构域(H_C结构域)中。

14.权利要求13所述的工程化的梭菌毒素,其中所述的至少一个氨基酸修饰位于所述 梭菌毒素的H_CN结构域中。

15.前面权利要求任意一项所述的工程化的梭菌毒素,其中所述的至少一个氨基酸修 饰是表面暴露的氨基酸残基的修饰。

16.前面权利要求任意一项所述的工程化的梭菌毒素,其中所述的至少一个氨基酸修 饰包括选自下列的氨基酸残基的修饰:天冬氨酸残基、谷氨酸残基、组氨酸残基、丝氨酸残 基、苏氨酸残基、天冬酰胺残基、谷氨酰胺残基、半胱氨酸残基或酪氨酸残基。

17.权利要求16所述的工程化的梭菌毒素,其中所述的氨基酸残基被赖氨酸残基或精 氨酸残基替代。

18.一种核酸，其包含编码根据权利要求1-17中任意一项所述的工程化的梭菌毒素的 核酸序列。

19.一种生产单链工程化的梭菌毒素蛋白质的方法，该蛋白质具有一条轻链和一条重 链,所述的方法包括在合适的宿主细胞中表达根据权利要求18的核酸，裂解所述的宿主细 胞以提供包含所述的单链工程化的梭菌毒素蛋白质的宿主细胞匀浆，并且分离所述的单链 工程化的梭菌毒素蛋白质。