[发明专利]在基因组之间多核苷酸的直接转移

说明书

本发明提供了用于将感兴趣重组多核苷酸从原核供体细胞的染色体直接转移至其他物种的原核受体细胞的染色体中的方法，其中该感兴趣多核苷酸包括至少一种感兴趣编码序列，优选为一种感兴趣基因，以及选择性标记，其中该供体细胞的染色体中的所述感兴趣多核苷酸的每一侧上的侧翼为衍生自该受体细胞的染色体的多核苷酸区域，并且其中这些侧翼多核苷酸区域具有足够的尺寸和序列一致性，以允许与在该受体细胞的染色体中的相应区域进行双同源重组。

对序列表的引用

本申请包含计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过引用结合在此。

发明领域

本发明提供了用于将感兴趣重组多核苷酸从原核供体细胞的染色体直接转移至其他物种的原核受体细胞的染色体中的方法，其中该感兴趣多核苷酸包括至少一种感兴趣编码序列，优选为一种感兴趣基因，以及选择性标记，其中该供体细胞的染色体中的所述感兴趣多核苷酸的每一侧上的侧翼为衍生自该受体细胞的染色体的多核苷酸区域，并且其中这些侧翼多核苷酸区域具有足够的尺寸和序列一致性，以允许与在该受体细胞的染色体中的相应区域进行双同源重组。

发明背景

在工业生物技术领域中，尤其是对于分泌的多肽，例如，酶，当要克隆并筛选新的基因时，枯草芽孢杆菌是目前优选的宿主微生物。这是因为该物种具有高转化频率和重组频率，其允许将基因快速并轻松的转化到枯草芽孢杆菌宿主中并且整合至其染色体中，便于后续的筛选。

众所周知，这些高频率还允许通过用染色体DNA简单的转化将来自一个枯草芽孢杆菌的基因轻松地转移至另一个枯草芽孢杆菌中。然而，一旦在筛选过程中鉴别了感兴趣基因，枯草芽孢杆菌不一定是最优选的表达宿主，并且，遗憾的是，通常很难并且繁琐去将染色体整合的异源DNA再进一步转移至其他所希望用于工业表达的物种，例如，至地衣芽孢杆菌宿主。

发明概述

本发明允许在不同物种之间的异源染色体整合的多核苷酸的轻松的转移。

在以下实例中，我们成功地首次克隆了从地衣芽孢杆菌受体细胞至枯草芽孢杆菌供体的足够大的上游和下游侧翼DNA区域，然后整合枯草芽孢杆菌供体中侧翼DNA区域之间的感兴趣基因和选择性标记。随后我们通过用来自枯草芽孢杆菌供体的染色体DNA来转化地衣芽孢杆菌受体，将感兴趣基因转移至地衣芽孢杆菌受体中，从而通过在来自枯草芽孢杆菌供体的进来的染色体DNA中的两个侧翼DNA区域与在地衣芽孢杆菌染色体中的相应的相同区域之间的同源重组，将该感兴趣基因位点特异性地整合至地衣芽孢杆菌受体的染色体中。

这种技术可具有针对转移较大感兴趣多核苷酸(例如物种之间的操纵子或功能性多基因簇)的具体相关性。

因此，在一个方面中，本发明涉及一种用于将感兴趣重组多核苷酸从原核供体细胞的染色体直接转移至其他物种的原核受体细胞的染色体中的方法，其中该感兴趣多核苷酸包括至少一种感兴趣编码序列，优选一种感兴趣基因，以及选择性标记，其中该供体细胞的染色体中的所述感兴趣多核苷酸的每一侧上的侧翼为衍生自该受体细胞的染色体的多核苷酸区域，并且其中这些侧翼多核苷酸区域具有足够的尺寸和序列一致性，以允许与在该受体细胞的染色体中的相应区域进行双同源重组；该方法包括以下步骤：

a)提供来自该供体细胞的染色体DNA，所述DNA包括该感兴趣多核苷酸，该感兴趣多核苷酸的每一侧上的侧翼为衍生自该受体原核细胞的染色体的多核苷酸区域；

b)将该受体细胞用来自步骤(a)的DNA进行转化；并且

c)选择成功转化的受体细胞，其中这种包括该选择性标记的感兴趣多核苷酸已经被整合至该受体细胞的染色体中。

优选地，该选择性标记已经在步骤(c)中通过在DNA的侧翼区与它们的在该受体细胞中的相应染色体区域之间的同源重组而整合至染色体中。